文末有福利,莫错过

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如今,关于胚胎干细胞(ESC)与诱导多能干细胞(iPSC)的各种研究正在全球范围内展开。每个英雄的背后总有默默付出的隐士,本文要介绍的就是一个经常被大家忽视,可的确是非常重要的一种细胞——小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)。

ESC与iPSC在体外培养极易自发分化,要解决这个问题,必须在培养体系中加入一些抑制分化因子在饲养层体系中维持培养。而MEF细胞是一种自小鼠胚胎中分离而来的成纤维细胞,常在ESC/iPSC中作为饲养层细胞的存在。自1998年首次在人ESC体外培养体系建立以来,经久不衰持续使用。

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图1. ESC/iPSC体外培养路线 (图源ATCC)

MEF细胞质量判断标准

当我们需要在ESC/iPSC培养中使用MEF作为饲养层细胞时,请留意以下3项质量判断标准

01 MEF出现生长停滞

明确使用的MEF细胞已经过灭活处理,一般可采用CCK-8检测的方式,检测细胞是否已经灭活完全,判断标准是该细胞在体外不再增殖。

02 MEF复苏率高

需进行细胞存活率测试,冷冻复苏后MEF细胞存活率>80%

03 对ESC/iPSC的支持能力

接种ESC/iPSC细胞,观察细胞形态,并检测ALP表达水平。

*ALP是一种PSC表型标志物,包括未分化的胚胎干细胞(ESC)、诱导多能性干细胞(iPSC)和胚胎生殖细胞(EGC)。ALP在大多数细胞类型中均有表达,但其在PSC内的表达水平明显升高。因此ALP染色已应用于PSC的鉴别染色,采用该方法可轻松将PSC与用作饲养细胞的MEF细胞及重编程实验中常用的亲代成纤维细胞区分开来。

OriCell®是赛业旗下致力于细胞生物学产品服务的专业供应商,拥有干细胞研究领域近18年的深厚经验,凭借卓越稳定的产品性能和业内的良好口碑,我们提供的细胞和培养基在全球积累了庞大的忠实科研用户群,助力9000多篇引用文献发表。

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ESC/iPSC支撑能力良好,培养的ESC/iPSC克隆边缘清晰,紧密度良好,少有分化现象。

2

细胞增殖能力丢失,7天增值率≥-30%,≤30%。

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左图:OriCell®MEF(灭活)支持小鼠ESC(mESC)培养。将mESC接种在OriCell®MEF(灭活)细胞上。在MEF上生长的mESC菌落紧凑,边缘清晰,表明了健康的未分化ESC。

右图:对使用 OriCell®MEF(灭活)支持mESC培养的细胞进行固定,加入BCIP/NBT染色工作液进行染色,mESC被ALP染色,染色颜色较深,形态较好,边缘较清晰,立体感较强。

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