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小RNAs(small RNAs, sRNAs)是一类短的调控RNA,通过互补序列沉默基因,在细胞的生命活动中起重要的作用。 在动物体内,sRNAs可通过细胞外囊泡,特异性跨膜蛋白,脂蛋白复合物等运输。 而在植物中,sRNAs通过胞间连丝实现胞间移动,并通过维管系统进行长距离运输。 研究表明,sRNAs也可以在宿主和互作生物体之间移动,并引起跨界RNA干扰(RNAi)。但是,sRNAs是如何跨界的?相关机制是什么?有研究发现,胃肠寄生虫 (Heligmosomoides polygyrus)通过外泌体将microRNAs(miRNAs)转运到哺乳动物细胞中以抑制宿主免疫。然而,sRNAs从宿主运输到病原体的机制依然未知。

2018年5月18日,美国加州大学华人教授金海翎团队在Science杂志在线发表了题为“Plants send small RNAs in extracellular vesicles to fungal pathogen to silence virulence genes”的研究论文。该研究发现,拟南芥可以通过类外泌体(exosome-like extracellular vesicles)将sRNAs运送到真菌(Botrytis cinerea)中,并诱导沉默关键致病基因。该论文第一作者为蔡强博士,通讯作者为金海翎教授。

为了鉴定真菌细胞中植物sRNAs,该研究利用了存在sRNA跨界的拟南芥-灰霉病病原体系统,并开发了一种原生质体纯化方法,以从感染的拟南芥叶片中分离出真菌细胞。本研究从纯化到的灰霉病菌原生质体中鉴定到了拟南芥sRNAs。为了验证植物是否是通过分泌囊泡将sRNA转移到真菌细胞中,研究人员从感染叶片的细胞外质外体液中分离出囊泡sRNA,结果与原生质体实验结果类似。

Tetraspanin-associated exosomes are responsible for transferring plant sRNAs to fungal cells.

拟南芥中有17个 TETRASPANIN (TET)-like 基因,其中TET8和TET9的表达受灰霉病病菌的诱导,并且TET8和TET9在结构上与哺乳动物CD63(specific exosome markers)类似,通过在拟南芥中表达TET8-GFP,发现TET8标记的细胞外囊泡可以被认为是植物外泌体。研究人员继续通过一系列生化和突变体分析,证明了宿主通过TET8和TET9相关的外泌体将sRNA转运到真菌细胞中。最后,研究人员证明宿主sRNA可以通过沉默真菌关键致病基因,从而有助于植物的免疫。

该研究发现的外泌体在跨界RNAi中的功能有助于开发有效的靶向病原体RNAs运送方法,对于将来的作物病害防治具有一定的意义。

Transferred host sRNAs silence fungal virulence genes and suppress fungal pathogenicity.

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