(一)母种培养基的形式
由于培养目的不同,培养基的形式也不一样。固体培养基通常有下述三种形式。
1.斜面培养基
将琼脂培养基注入试管,经灭菌后放置成斜面即为斜面培养基。斜面培养基一般适用于母种扩大培养及菌种保藏。
2.平板培养基
将灭菌琼脂培养液倒人培养皿与三角烧瓶中,凝固后制成的培养基即为平板培养基。平板培养基用于菌种分离及菌类研究。
制备平板培养基是微生物工作中的一项基本操作技术,其方法是在酒精灯附近,右手拿住装有灭过菌的培养基的三角瓶,左手拔出棉塞后,转夹在右手小指与手掌间;左手拿住培养皿,拇指和食指抓住皿盖,小拇指和无名指托住皿底。将培养皿在酒精灯火焰旁打开,将培养基倒人培养皿中,盖好皿盖,摇匀放在平面上冷却即成。
3.高层培养基
将琼脂培养基注入试管内灭菌,直立制成的培养基即为高层培养基。这样接人菌种后,虽然发育的面小了一点,但培养基的厚度增大、营养丰富,时间长也不容易干燥、开裂。因此保存菌种常采用高层培养基。
(二)母种培养基的制作
为了保证培养基的质量,配制时要按照一定的操作步骤进行。应该选择合适的浸煮容器,一般可用玻璃缸、搪瓷缸或铝锅等。不能用铜、铁器皿,以免铜锈或铁锈混入培养基中。下面我们讲解一部分,剩下的部分会在下篇文章中解说。
1.计算
选好培养基配方,按需要培养基的数量计算各种成分的用量后称量。
2.称量
固体物的称量,要求准确。液体用量杯量。微量元素与生长元素需要量很小,难以称准,可先配成较浓的溶液,再取出需要的量。
3.配制
谷物、植物块茎等要先制浸出液。以配制马铃薯葡萄糖琼脂培养基为例说明如下:将选好的马铃薯洗净、去皮、挖去芽眼,切成薄片,称取200g放入容器中,加水1000mL,加热煮沸15~20mi,至熟而不烂的程度,用4~8层纱布过滤,取其滤液,加水补足1000mL。此液为马铃薯煮汁。然后在煮汁中加入琼脂,小火加热,不断用玻璃棒搅拌,至琼脂全部溶化,再用纱布过滤1次,补水至1000mL,加入葡萄糖等其他物质,再煮几分钟,搅拌溶化,防止煳底或溢出。烧煳的培养基营养物质被破坏,而且容易产生对食用菌有害的物质,不宜再用。加热过程蒸发的水分应在最后补足。
在配制合成培养基的过程中,为避免生成沉淀造成营养的损失,要按顺序加入。先加缓冲化合物,溶解后加入主要元素,然后是微量元素,最后加入维生素、生长素等。最好是一种营养成分溶解后,再加入第二种营养成分。微量元素应配成母液,待其全部溶解后,再按用量加人培养基中;牛肉膏不易溶于冷水,可用热水溶化后加入;若有些物质难溶解,可通过加热等方法溶解后,再加人培养基中。如需使培养基清亮透明,可以将溶好的培养基用纱布趁热过滤。
玉米粉、蛋白胨等干粉类物质,先加人少量水调成糊状后再加人,防止结块。
琼脂的用量一般为2%,但生产中常根据季节变化和使用目的进行必要的调整。夏季气温高,试管内水分蒸发量大,为防止斜面脱水干裂,琼脂用量可减少到1.8%;冬季琼脂用量可增加到2.3%;孢子萌发时,琼脂用量可减少到1.6%-1.8%;进行菌种保藏时,琼脂用量可增加到2.5%。
猴头等食用菌的最适pH值为4~5,此时琼脂难凝固,可将培养基营养成分和琼脂分开灭菌,然后在无菌条件下混合凝固。也可按照酸化培养基的制备方法制备酸化培养基。
热门跟贴