蛋白无法表达，还形成了包涵体，师姐都忍不住吐槽了|培养基|活性|细胞|蛋白

蛋白表达是许多课题中的重要内容，实验很常见，但操作起来，还是有不少困难。看到目的蛋白大多数在沉淀中，心态直接炸了。师姐还不忘补刀「恭喜你呀师弟，蛋白都变成了包涵体，实验不用做了！」但经过一次次实验洗礼，以及向师兄师姐不断请教，我也整理了一些经验。

如何得到可溶的蛋白

可以考虑选用表达量不高的蛋白表达系统，或是有助于可溶性表达的融合蛋白表达系统，以及使用基本培养基等均可得到可溶蛋白。此外，大肠杆菌内还原性过高会导致二硫键不能正确形成，容易导致表达产物不溶，此时可以更换菌株。

什么温度可以使溶解性蛋白产量达到最大

实验发现 37℃ 生长常常会使一些蛋白累积形成包涵体，而 30℃ 生长则可能产生可溶的和有活性的蛋白。在某些情况下，低温（15～20℃）延长诱导时间可以使溶解性蛋白的产量达到最大。

如何规避包涵体、内毒素问题

既然常常需要调试实验才能使蛋白溶解性达到最大，那换个角度想，是否有一个方法可以规避包涵体的问题呢？这个问题师兄师姐也不知道，最后还是导师给我了答案，他让我关注 CFS 无细胞蛋白表达系统。它区别于一般大肠杆菌表达系统，不仅可以最大限度的避免包涵体、内毒素这些常见问题，而且表达成功率很高。根据文献分析，表达 13,000 个蛋白，成功率 96%，表达后可溶率 95%。

在蛋白表达中是否还存在其他难点，该怎么解决？

CFS 无细胞蛋白表达系统又能帮助我们处理哪些问题？

2021 年 10 月 20 日，丁香园将举办「玩转蛋白表达：一节课讲清热门蛋白表达系统」研讨会，邀请了两位业内专家，针对传统蛋白表达的方式和难点、蛋白表达如何进行方案设计等问题做精彩讲解，扫描下方二维码或点击阅读原文即可免费学习，千万不要错过。

会议日程

主讲人：刘翼浩，博士，毕业于中国农业大学生物学院，微生物学专业，曾从事蛋白表达纯化研发工作。目前在北京义翘神州科技股份有限公司主要负责培养基产品线和北京地区技术支持的工作，现已帮助十余家实验室和公司建立了其自己的蛋白表达平台。

分享主题：如何建立优质、高效的重组蛋白真核表达平台

分享时间：14:00～14:45

内容亮点：

建立重组蛋白真核表达平台的必要性

建立蛋白表达系统的必备条件

蛋白表达方案设计

蛋白表达过程中常见问题解析