基金项目：亚洲百合小鳞茎诱导及温室繁育研究|培养基|植体|鳞片|鳞茎

基金项目：亚洲百合小鳞茎诱导及温室繁育研究

基金项目　新城区重大科技专项“新、优、奇草本花卉引种研究”。

孙丽清等

亚洲百合色彩丰富，既能作切花、盆栽，又能在园林绿地中应用，在我国的花卉市场占有很大的比重。目前亚洲百合生产用种球主要来自荷兰，由此带来花期集中经济效益下降、运输不当种球腐烂种植成本增加等系列问题。为满足生产需求，降低运输和生产成本，以叶、鳞片、茎段、根为外植体对百合进行了组培快繁研究。在以百合鳞片、叶片、根等为外植体诱导的试验中，发现鳞片的诱导能力最强，鳞片基部诱导小鳞茎的能力最强，中部次之，上部最弱。以新疆百合鳞片为外植体，发现最适诱导培养基为ＭＳ＋１ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋１ｍｇ／ＬＮＡＡ，鳞片中部＞下部＞上部。

在对百合鳞片不定芽诱导、芽增殖、壮苗和生根试验中，分别获得了最佳诱芽培养基（ＭＳ＋１．０ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ）、最适增殖培养基（ＭＳ＋１．０ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ）、最佳壮苗培养基（ＭＳ＋１．０ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ＋０．１ｍｇ／ＬＧＡ３）和最佳生根培养基（ＭＳ＋０．１ｍｇ／ＬＩＢＡ）。柯义强等以兰州百合为研究对象，筛选出了愈伤组织诱导最佳培养基（ＭＳ＋３ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０．３ｍｇ／ＬＮＡＡ）、促进发芽最佳培养基（ＭＳ＋３ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０．３ｍｇ／ＬＮＡＡ）、促进生根最佳培养基（１／２ＭＳ＋３ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ＋２ｍｇ／Ｌ活性炭）。上述研究中采用６－ＢＡ和ＮＡＡ对鳞片进行了不定芽诱导或愈伤组织诱导，并对随后的壮苗和生根培养基进行了研究。笔者以亚洲百合的３个栽培种为材料，对鳞片不同部位在不同培养基上的小鳞茎诱导情况及诱导产生的小鳞茎在温室中的生长进行了研究，以期获得能直接用于鳞茎繁殖生产的诱导小鳞茎通用培养基和培养程序，为今后亚洲百合种球的工厂化生产提供技术支撑。

１　材料与方法

１．１　试验材料　亚洲百合栽培种，“热情红（ＲｅｄＭａｔｒｉｘ，ＲＭ）”“热情金（ＧｏｌｄｅｎＭａｔｒｉｘ，ＧＭ）”和“热情（Ｍａｔｒｉｘ，Ｍ）”的健康鳞茎，周径为１５～１８ｃｍ。去除最外侧的一层鳞片后，将鳞片从鳞茎上剥离，每个鳞茎可剥离２０～３０片的鳞片。

１．２　鳞片切割及培养　将每个鳞片按照上、中、下３个部分进行切割。在超净工作台中将切割好的鳞片在７５％乙醇消毒３０ｓ，０．１％ＨｇＣｌ２消毒１０ｍｉｎ，无菌水冲洗３～５次，然后切成０．５ｃｍ大小，接种到诱导培养基上。诱导培养基以ＭＳ（３％蔗糖，０．７％琼脂）为基本培养基，添加不同浓度的ＮＡＡ和ＴＤＺ，分别为Ａ０．０５ｍｇ／ＬＮＡＡ＋０．２ｍｇ／ＬＴＤＺ；Ｂ０．０５ｍｇ／ＬＮＡＡ＋０．５ｍｇ／ＬＴＤＺ；Ｃ０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ＋０．２ｍｇ／ＬＴＤＺ；Ｄ０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ＋０．５ｍｇ／ＬＴＤＺ；Ｅ０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ＋０．２ｍｇ／ＬＴＤＺ；Ｆ０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ＋０．５ｍｇ／ＬＴＤＺ。（２２±２） ℃、暗处进行诱导。３０ｄ时小鳞茎诱导率。小鳞茎诱导率＝（诱导出小鳞茎外植体数／接种外植体总数）×１００％。

统计

１．３　鳞片再诱导　３０ｄ时将“１．２”中诱导出的直径≥０．５ｃｍ的小鳞茎掰下，将剩余部分继代在相同培养基上。每３０ｄ将直径≥０．５ｃｍ的小鳞茎掰下，剩余部分再继代在相同培养基上，直到鳞片变褐或皱缩为止。统计掰下的小鳞茎个数，计算诱导力。鳞片诱导力＝小鳞茎总数／鳞片数。

鳞片

１．４　诱导小鳞茎的种植　将掰下的直径≥０．５ｃｍ的小鳞茎洗净培养基，种植于温室培养土中（品氏基质 ∶珍珠岩＝１∶１），种植深度为０．５ｃｍ。每６０ｄ采用数码相机对小鳞茎在温室中的生根、长叶进行记录，并对鳞茎直径进行测量。

１．５　数据统计分析　采用Ｅｘｃｅｌ及ＳＰＳＳ１８对试验数据进行处理和统计分析。

２　结果与分析

２．１　不同培养基对亚洲百合小鳞茎的诱导能力　６种培养基中，Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ和Ｆ均可在亚洲百合的３个栽培品种上诱导出小鳞茎。Ｃ的诱导率最高为１００％；其次为Ａ和Ｂ，诱导率最高分别为９５．２４％和８１．２５％；Ｄ和Ｆ在３品种上的小鳞茎诱导率最高分别为１３．３３％和２７．２７％；Ｅ的诱导力最差，在３个品种上均未诱导出小鳞茎。表明Ａ、Ｂ和Ｃ在诱导亚洲百合小鳞茎上效果较好（表１）。

个

２．２　培养基Ａ、Ｂ、Ｃ对亚洲百合不同品种不同部位的诱导能力　从３个品种在Ａ、Ｂ和Ｃ的小鳞茎诱导率看，热情金在Ｃ的诱导率最高，其次为Ａ和Ｂ；热情红在Ａ上的诱导率最高，其次为Ｂ和Ｃ；热情在Ａ上的诱导率最高，其次为Ｂ和Ｃ（表１）。３个培养基中，Ａ对３个品种的诱导率均在８０％以上。

上

对比Ａ、Ｂ和Ｃ培养基对不同品种不同部位的诱导率，发现除Ａ培养基能在热情鳞片的上部诱导出小鳞茎外，其余均不能诱导出小鳞茎；鳞片中部均可诱导出小鳞茎，除Ａ培养基上热情鳞片中部的诱导率达９０％以上，其余诱导率均小于５０％；除Ａ培养基上热情中部和下部相差不明显外，其余均表现为鳞片下部显著高于中部，诱导率是中部的２～１１倍（表１、图１）。鳞片不同部位诱导小鳞茎的能力表现为下部＞中部＞上部。从诱导的小鳞茎大小看，Ａ和Ｂ诱导的比Ｃ的大（图１）。

表１　不同培养基上亚洲百合不同品种的小鳞茎诱导率％

图１　亚洲百合不同品种鳞片的不同部位在诱导３０ｄ时小鳞茎的生长情况

２．３　鳞片的诱导能力　将下部在Ａ、Ｂ、Ｃ培养基中诱导出的直径≥０．５ｃｍ的小鳞茎掰下，将剩余部分继代在同种培养基上。２～３次代后，鳞片变褐或皱缩。３个品种在不同培养基上鳞片诱导的直径≥０．５ｃｍ的小鳞茎数量存在明显差异，Ａ平均每个鳞片可诱导出１．８８～２．３１个小鳞茎，Ｂ上是１．３３～２．３３个，Ｃ上最少。表明Ｃ上诱导的初始小鳞茎较小，后期继代中能膨大到０．５ｃｍ的速度慢（表２）。

继

中

表２　不同亚洲百合品种的鳞片诱导的小鳞茎数个／片

２．４　诱导的小鳞茎在温室中的生长状况　将Ａ诱导出的直径≥０．５ｃｍ的小鳞茎种植于温室中，成活率可达１００％。每隔６０ｄ，随机挖出幼苗进行照相，对鳞茎直径进行测量。随着种植时间的延长，地下小鳞茎逐渐膨大，种植１２０ｄ时，鳞茎是最初种植时的２．４８倍，随后膨大速率略有下降，２４０ｄ时，鳞茎从最初的１个增加到２～３个；地上部叶数增加，叶部变宽（图２）。

上

图２诱导小鳞茎在温室中的生长情况

３　讨论

高效、稳定的百合组培快繁体系，对于百合种质资源保存、育种、基因工程及生产应用具有一定的意义。建立百合小鳞茎组培快繁、驯化生长体系有利于优质百合鳞茎的快速繁殖。

东方百合、兰州百合和野百合鳞茎诱导率为下部＞中部＞上部。肖玉菲等在对龙牙百合和大百合的研究中，也认为鳞片下部为最佳组织培养外植体。该研究中除Ｅ培养基外，亚洲百合栽培种“热情红”“热情金”“热情”在其余培养基上均表现为鳞片下部的诱导率最高，远高于鳞片的中部和上部，这与前人研究结果相符，表明鳞片下部是诱导小鳞茎的最佳外植体。

张旭红等建立了欧洲百合高效再生体系，获得了诱导愈伤组织（ＭＳ＋０．２ｍｇ／ＬＴＤＺ＋０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ）和愈伤组织增殖的最佳培养基（ＭＳ＋０．５ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ）。张施君等采用６－ＢＡ和ＮＡＡ对新铁炮百合和金百合鳞片进行了诱导，分别获得了最佳芽诱导培养基、芽增殖培养基和结球培养基，对诱导出的小鳞茎进行了根系诱导，使其移栽成活率达９０％以上。蒋细旺等得出０．１～０．５ｍｇ／Ｌ的ＮＡＡ对百合鳞茎诱导分化有促进作用。马生军等筛选获得了百合鳞片最佳诱芽培养基、最适增殖培养基、最佳壮苗培养基和最佳生根培养基。柯义强等筛选出了适合百合的愈伤组织诱导、促进发芽和促进生根的最佳培养基。该研究中培养基（ＭＳ＋０．０５ｍｇ／ＬＮＡＡ＋０．２ｍｇ／ＬＴＤＺ）上３亚洲百合品种鳞片下部小鳞茎的诱导率均大于８０％，且诱导出的小鳞茎个体较大，单个鳞片诱导的小鳞茎数最多；移栽在温室中成活率达１００％，鳞茎可正常生长、膨大。与前人研究相比，该研究采用ＮＡＡ和ＴＤＺ可直接在亚洲百合鳞片上诱导出小鳞茎，诱导出的小鳞茎可直接用于温室种植，减少了诱导步骤，缩短了快繁及生产时间，因此在鳞茎快繁生产中有一定的意义。

兰州

个

４　结论

ＭＳ＋０．０５ｍｇ／ＬＮＡＡ＋０．２ｍｇ／ＬＴＤＺ可作为诱导亚洲百合小鳞茎的通用培养基，诱导出的小鳞茎可直接用于最后的鳞茎繁殖生产。