IgG抗体内含有多个二硫键，其中链内的二硫键被包含在两条反向平行的β折叠链之间，无法暴露在溶剂中，通常比较稳定，不易被打开。而链间的二硫键则高度暴露在溶剂中，能够被还原性试剂（如DTT）还原形成巯基。这些巯基可以与带有活化酯、马来酰亚胺等亲电基团的连接子-小分子毒素复合物发生化学反应，进而实现偶联。以IgG1为例，IgG1含有四个链间二硫键，被还原后最多可暴露出8个巯基，理论上每个IgG1抗体最多可连接8个小分子药物。基于二硫键偶联的ADC药物包括Brentuximab vedotin等。

SMCC是一类含有N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活性酯和马来酰亚胺的双功能偶联剂.可以将分别含有巯基和氨基的化合物键接在一起。NHS活性酯与伯胺在PH7-9的环境形成酰胺键。马来酰胺与巯基在PH6.5-7.5的环境下形成稳定的硫醚键。在水溶液中，NHS活性酯的水解是（与氨基的反应）个竞争反应。马来酰胺比NHS稳定，但是在PH大于7.5时，马来酰胺会慢慢水解，失去与巯基反应的特异性。因而，在使用SMCC时通常是在PH7.2-7.5的环境下进行，并且先让NHS发生反应。

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SMCC结构里的环己烷环可以降低马来酰胺的水解速率。这使得蛋白质在用SMCC修饰之后可以冻干存放一段时间。很多蛋白质都选用该试剂来进行马来酰亚胺修饰。

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用SMCC来制备抗体-酶或者半抗原作载体的蛋白质，经常采用两步合成法。首先，含有氨基的蛋白质与几倍的偶联剂反应，反应结束后通过脱盐柱或者透析的方法除掉没有反应玩的SMCC。然后，再与含有巯基的蛋白质反应。在实际操作中要注意的是，SMCC怕潮湿，存放时要和干燥剂一起存放。并且使用中从冰箱拿出来时要先在室外放置一段时间平衡温度，以免立刻开启，空气中水分遇冷凝结，破坏SMCC结构。

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