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1.2含药血清的制备方法

1.2.1实验动物的选择

血清药理学实验动物的选择要遵循的原则是使体外培养细胞在该种动物血清中生长良好、形态正常，对照组血清质量稳定，并且血清添加量高。一般选择与人类生物特性尽量相近的动物，从而缩小或避免动物血清和人血清在理化、生物等特性上的差异。离体器官、组织、细胞的供体动物和含药血清的供体动物也应尽量同一来源[6]，因此选用的实验动物以大鼠、小鼠居多。另有学者认为，药物临床所应用的患者均存在一定程度的病理状态，当中药应用于病理状态下的实验动物，其作用部位有效成分的血药浓度与正常状态下相比有差异。有学者比较了正常状态下和病理状态下大鼠 ig 清肝化瘀方药后含药血清对肝癌细胞SMMC-7721 的作用，发现前者有轻微的抑制作用，而后者有明显的抑制作用并且能诱导肝癌细胞凋亡，提示在大鼠病理状态下制备的血清中有效成分与浓度可能发生变化，对肿瘤细胞的抑制作用更强。但李丹等[8]将大鼠进行造模，观察心肌缺血模型大鼠与正常大鼠 ig 双参宁心方后的血清对缺氧/复氧H9C2 细胞的影响，结果发现模型与正常大鼠含药血清对 H9C2 细胞活力均有所提高，但正常大鼠含药血清组细胞总体活力强于模型组。因此，选择健康动物还是模型动物需要进一步探讨。

1.2.2给药方案的选择

（1）给药剂量：若将含药血清看作一种药物，那么给药剂量取决于2 个方面：一是动物给药量，二是培养体系或反应体系中含药血清浓度。动物给药量换算公式为给药剂量＝人临床用量×动物等效剂量比值×培养液中血清稀释度，实际操作时会受到给药浓度和体积的限制，因此给药剂量应参照具体药物的量效关系研究，不能一概而论。而含药血清浓度的确定，关键在于如何使体外培养体系内药物浓度与血药浓度相等又不影响所培养的组织、细胞生长。有学者将得到的含药血清制成冻干粉，以冻干粉的形式加入反应系统，使之达到需要的浓度，能够较好地控制含药血清浓度。

（2）给药、采血时间：由于中药成分复杂，各成分理化性质及体内过程不完全一样，药动学参数各异，很难采用统一的标准设计给药次数与采血时间。目前有几种经验给药方案[11]：1）7～10 d 给药法（每天 1 次，连续给药 7～10 d）；2）3 次给药法（连续 3 次，第 1、2 次间隔 20 h，第 2、3 次间隔 4 h）；3）2 次给药法（第 1 次给药后 2 h，再以相同剂量重复给药 1 次）等。采血时间一般在末次给药后 0.5～3 h，一般不超过 6 h，采血时间过早，部分药物组分未被吸收入血；采血时间过长，部分药物组分在体内发生转化或被排泄掉，理想的采血时间应落在药物达到稳态血药浓度期间。有学者对大量的中药药动学参数进行分析后，提出中药血清药理研究通用的给药方案：每天给药 2 次，连续给药 3 d，末次给药 1 h 后采血。进行血清药理学实验前可参照经验给药方案，并结合药物的药效动力学研究来确定最佳的给药、采血时间。

1.2.3血清的处理

血清中含有许多酶、抗体、补体、细胞因子及其他生物活性物质，可能对体外培养的组织器官、细胞、病毒、病原菌等产生直接影响而干扰实验结果，影响药物疗效的客观评价。对血清进行灭活有助于减少血清的非药理学干扰，也符合减少微生物污染的常规细胞培养要求。大部分研究人员对含药血清采用 56 ℃水浴加热 30 min的灭活方式，可以除去血清本身含有的补体等干扰实验的活性成分；也有研究人员将含药血清经乙醇、丙酮等有机试剂处理，通过使蛋白质变性去除血清中的酶、激素等，从而保留药物本身的作用。但有学者比较了无蛋白血清和正常血清与药物的结合情况，发现无蛋白血清中的游离药物少于正常血清，证明处理后的血清与体内实验和临床用药情况不相符。含药血清无论是否进行灭活处理都会遇到特定的问题：若不灭活，可以最大限度地保存各种活性物质，但是也难以排除血清中原有生物活性物质对中药成分的干扰；而灭活则可能将药物诱生的活性成分除掉，减弱血清药效。因此可设置空白血清组作为对照，或根据实验所选指标及药物本身性质来判断含药血清是否需要灭活。

本文转自文章：《中药血清药理学、血清药物化学的研究概况及展望》

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