本研究评估了南美白对虾感染EHP后，30天内感染肝胰腺微生物群的组成、多样性和功能。这些发现极大地提高了对感染EHP虾的肝胰腺组织中，疾病特异性微生物群落的理解。

一、研究方法

研究采用来自（美国夏威夷瓦胡岛）海洋研究所的南美白对虾（约5克），均通过SPF认证，包括EHP在内的病原体检测结果呈阴性。在实验之前，在100L（25°C）循环养殖系统中驯化2周，并用工业虾饲料（40%蛋白）喂养。

在南美白对虾接触EHP（0天）之前，将胰腺肝组织取样切除无菌，部分在液氮中快速冷冻，其余固定在AFA。第二天，共有36只SPF虾被转移到南美白对虾养殖试验池，并感染了EHP。试验一共进行30天，同时，在试验期间对实验虾进行了取样，监测环境参数，如：温度、盐度、pH 值……。

图1：实验设计

二、研究结果

数字病理组织：EHP检测和感染严重程度的定量

根据Lightner表示虾的肝胰腺有5个感染水平：I0、I1、I2、I3和I4，EII值为0%；0,004–0,14%；0,51– 5,92%；分别为6.85~9.26%和10.15~45.67%（图2）。该病共3个阶段用于描述感染周期：EII表示的初始阶段、发育阶段和晚期阶段（图3A），按感染等级（I0-I4）分病阶段（图3B）和每个疾病阶段的平均值（图3C）。

图2：EHP感染强度级别，感染程度使用EHP感染指数（EII）通过原位杂交 (ISH) 评估传染性。

图3：评估EHP感染。（A） EHP感染程度（I0-I4）;（B） 按疾病阶段划分的感染（C） 每个疾病阶段的平均值。

第一阶段：包括感染后的前12天（dpi），其中EII平均值较低（0.92±3.06%）。EHP只在9dpi和12dpi抽样虾中检测到。第一阶段后，所有取样虾均对EHP（I1-I4）呈阳性。

发育阶段从15日开始，以24dpi结束，并伴有EII的平均值较高（8.08 ± 13.75%）。这一时期的特点是在整个测试过程中，高感染水平（I3 和 I4）的受感染虾和I4水平的虾具有最高的EII值（31.97±19.37%）。在最后阶段（27至30dpi），高感染性虾（I3和I4）的数量减少，EII平均值下降（5.44±6.28%）。

在晚期，当虾处于周期性感染时，观察到一种接近模式。根据这些结果，EHP可以繁殖，直到虾达到I4感染，然后寄生虫的负荷开始减少，直到虾达到I1感染。这种模式可以在整个养殖周期中重复进行，因此，EHP可以繁殖，直到虾达到I4感染，然后寄生虫的负荷开始减少，直到虾达到I1感染。

三、微生物成分分析

在细菌中，指定的分级分类允许识别两个领域，细菌（97-100%）和真菌（<3%）。总共有20种细菌（11种未分类）和3种真菌被识别，分为234个属（215个未分类）。在真菌中，已确定一个域。共有3个真菌行业被确定并分为32个属（5个未分类）。在细菌中最具代表性的门包括变形菌门 （12-98%）、厚壁菌门（1-24%）和放线菌门（0.3-82%）（图4A）。

图4：不同疾病阶段虾的微生物群。其中（A）细菌和（B）真菌分类。

在真菌中，大多数代谢途径与碳水化合物代谢有关，这表明，在后期的真菌可以利用被EHP感染虾的碳水化合物储备存，这一假设得到了转录、蛋白质组学和代谢分析的支持，其中能量代谢，如分解、消化和吸收碳水化合物，由EHP感染调节。EHP感染，导致慢性周期性退化，导致细菌紊乱（图8）。当高胰肝储备达到高传染性强度（I4）时，EHP会生长，当营养储备枯竭时，病原体的繁殖将停止或减少。如果条件有利，又暂时恢复，胰腺肝再次成为EHP的合适病灶。

图5：显示在研究期间根据疾病阶段感染EHP（30天）对虾的胰腺肝脏产生的主要变化

四、结论

南美白对虾感染EHP可能导致有益微生物，以及与养分获取和虾健康相关的功能的丧失。EHP感染持续时间越长，感染强度越高，肝胰菌群的变化就越明显，弧菌的数量的增加。在EHP感染期间，被分离出多种细菌，其中一些可以培养，并用作益生菌，以缓解EHP病的发展。