前言

n-6和n-3系饲料中的多不饱和脂肪酸 (PUFA) 已被证明有利于水生动物的生长和非特异性免疫（Torrecillas & cs.2018）。

一、饲料中多不饱和脂肪酸的作用

合理比例的饲料多不饱和脂肪酸，尤其是二十碳五烯酸（C20：5 n-3，EPA）、二十二碳六烯酸（C22：6 n-3，DHA）、α-亚麻酸（C18:3 n-3，ALA），和亚油酸 (LA, C18:2 n-6) 与虾PUFA缺乏或过量饲料相比，可增强南美白对虾的抗病性，改善生长性能和卵巢发育 (Yu et al., 2016)。

目前，关于LA（亚油酸）或ARA（亚麻酸）如何影响南美白对虾的生长、免疫力和抗病性的资料还不够。为此，研究人员近期开展了一项研究，寻找饲料中LA和ARA的适宜用量，以深入探讨上述问题。

二、研究方法

1、试验在农业大学水产养殖场进行。 虾苗（重0.11±0.02g，长2.49±0.22cm）获自某育苗场，并用工业饲料驯化1周。 然后，将虾随机分配到24个水箱（70 升）中，水体盐度为15ppt，密度为30尾/水箱。

2、虾在优化的环境条件下饲养了56天，虾每天喂食4次，直到吃饱为止；每天两次（8:00和17:00）通过排污清理水箱中剩余的饲料和粪便，每天更换水箱中大约五分之一的水。

3、8种试验配方饲料，粗蛋白 (42%)、脂质 (6%) 和PUFA方面相似，如表1和表2所示。对照饲料组（未添加LA和ARA，用CK0表示），3种水平的LA饲料组（5.3、9.5和16.2g/kg，表示为LA5.3、LA9.5 和 LA16）；4种不同水平的ARA饲料（0.2、1.9、3.8和11.1 g/kg，表示为ARA0.2、ARA1.9、ARA3.8和ARA11)。每种饲料组共有3个水箱。

表1：实验配方及成分

表2：各处理主要脂肪酸组成、粗蛋白和粗脂含量（ALA：α-亚麻酸； EPA：二十碳五烯酸； DHA：二十二碳六烯酸； LA：亚油酸； ARA：花生四烯酸）

三、研究成果

1、在喂食试验结束时，所有虾在收获前禁止投喂24小时，以便对虾清理肠道。然后，从每个水箱收集所有虾，在冰水中麻醉后称重和计数。最好，收集组织（包括：肠、肌肉和肝胰腺）并立即在液氮中冷冻，并储存在零下80摄氏度，直至RNA提取总量、评估脂肪酸组成和免疫酶活性。

本实验中虾的生长结果如表3所示。相应地，随着饲料中LA从5.3增加到16.2 g/kg (p. < 0.05)，虾的WG和SGR显着增加。在饲喂CK0饲料的虾中检测到较低的WG和SGR，而在投喂LA16.2饲料的虾中获得了较高的生长率，另外，ARA饲料组虾之间的WG存在显着差异。

表3：实验虾生长结果

图1：参与南美白对虾LC-PUFA合成的基因表达。（MU：肌肉，IN：肠道，HE：肝胰腺）

如图1所示，饲料中ARA从0.2增加到11.1g/kg，或者饲料中LA从5.3增加到 9.5 g/kg，Δ6FAD和Elovl5的相对表达显着增加。

2、有趣的是，在所有饲料组中，肌肉中的EPA和DHA水平都高于虾的肝胰腺。组织中脂肪酸浓度的主要差异可能是由于组织代谢和相关基因表达的差异。肝胰腺作为脂质代谢的主要器官，可以选择性地使用饲料不饱和脂肪酸来支持其他代谢活动，或选择性地积累PUFA，或通过减少Δ6FAD和Elovl5表达来降低LC-PUFA生物合成的效率 (Tocher, 2015)。

许多结果表明，虾可以利用ALA合成EPA和DHA，并在酶Δ6FAD、Δ5FAD和Elovl5的影响下将LA转化为ARA（Feng等人，2021年）。富含亚麻籽油或大豆油的饲料改善了Δ6FAD和Elovl5基因的表达，主要是因为亚麻籽油和大豆油富含ALA和LA（Zhang et al., 2022）。相反，在饲料中添加ARA、EPA和DHA会抑制这些基因在水生物种中的表达（Wang et al., 2021）。 这可以解释为ALA和LA互相竞争，以获得一组饱和酶和延长酶，这些酶分别转化为EPA、DHA 和 ARA。这种调节机制在某种程度上可以弥补饲料中≥C20多不饱和脂肪酸含量低于植物油基饲料的水平。此外，高饲料ARA会抑制虾和其他海洋物种中内源酶对n-6 LC-PUFA的生物合成（Feng等人，2021年）。

3、在图2和图3中，肌肉和肝胰腺中的SOD活性和MDA含量随着饲料LA从5.3增加到9.5g/kg而降低，然后随着LA增加到16.2g/kg时增加，肝胰腺中的CAT活性与SOD活性的结果一致。相反，LZM、AKP和ACP的活性随着饲料中LA含量从5.3增加到9.5g/kg而增加。总体而言，SOD和CAT的活性以及MDA含量随着ARA从0.2增加到3.8 g/kg而降低，LZM和AKP的活性随着ARA摄入量从0.2增加到3.8g/kg而增加，然后随着ARA的增加而降低。AKP和ACP在营养物质的分解和同化、消化和解毒过程，以及弱细胞的自身消化中起着重要作用（Pérez-Acosta等人，2016年）。

4、在这项研究中，当ARA从0.2增加到1.9或LA从5.3增加到9.5 g/kg时，南美白对虾的AKP和ACP活性增加，表明免疫力受到饲料中LA和ARA含量的影响。该结果还表明，在ARA从0.2到3.8g/kg，或者LA从5.3到9.5g/kg的情况下，LZM活性在虾饲料中得到增强。LZM是水产动物体内非常重要的免疫因子，可通过破坏细胞壁的肽聚糖来降解致病性革兰氏阳性菌的细胞壁，高LZM活性意味着对致病菌具有高抗性。日粮中n-3 PUFA含量为8.5-12.5g/kg提高了抗氧化能力和免疫力。 然而，过量摄入n-3 PUFA会导致脂质过氧化，并降低LZM活性（Yu et al., 2016）。

图2.：饲料LA浓度对南美白对虾酶活性的影响。（MU：肌肉，HE：肝胰腺）

图3：ARA 饲料浓度对南美白对虾酶活性的影响。（MU：肌肉，HE：肝胰腺）

5、受LA或ARA水平影响的SOD和CAT基因的相对表达（如图4所示）。 因此，肌肉和肝胰腺中的表达高于肠中。随着饲料中LA从5.3增加到9.5g/kg，SOD表达呈下降趋势，而CAT表达随着LA从5.3增加到9.5g/kg而增加。类似地，组织中的SOD表达随着ARA从0.2增加到1.9g/kg而增加，CAT表达随着ARA从0.2增加到3.8g/kg而增加。

图4：SOD和CAT基因在白对虾组织中的相对表达。

四、研究结论

综上所述， 结果表明在饲料中适当补充LA或ARA，可提高南美白对虾的整体生长效率和非特异性免疫力。饲料中适当浓度的ARA（3.8g/kg）和LA（5.3-9.5 g/kg）可增加LZM和AKP活性，同时显著降低SOD活性和CAT，以及MDA含量。