文/华中农业大学 陈昌福，武汉科研时代生物技术有限公司 周鑫军

陈昌福老师寄语

这是我们根据在江苏省盐城地区预防养殖异育银鲫的造血器官坏死症，以及在辽宁省沈阳市辽中区预防养殖鲤的疱疹病毒病，取得的实际预防效果撰写的一份资料，我们愿意与广大水产养殖业者分享。

目前，水产养殖动物的各种病毒病至今尚无有效的药物，可以治疗已经患病的水产养殖动物。但是，有效地预防水产养殖动物的病毒病，则是完全有可能做到的。对于水产养殖动物的疾病，长期以来我们坚持的方针是，“以防为主，防重于治”，尤其是对于发病后尚缺乏有效治疗措施、方法和药物的疾病，成功地预防疾病就更有意义了。

对水产养殖动物给予免疫多糖类物质，通过调节水产养殖动物自身的免疫机能，达到预防水产养殖动物疾病的目的，是国内外水产科学工作者研究的热点问题，也是国内外水产养殖业者正在采用的防病措施，已经取得了大量研究成果、成功的案例和许多成绩。

在世界范围内，水产养殖动物不仅种类众多，不同地方采用的养殖方式与技术各异，不同水产养殖动物的各种疾病流行范围与危害程度也存在很大差别。为了确保应用免疫多糖能有效地预防水产养殖动物疾病，就需要对免疫多糖采用有针对性地应用程序。重要的是要根据水产动物疾病流行的时间与规律，制定免疫多糖相应的应用程序。

这篇文章中介绍的是对养殖银鲫和鲤应用免疫多糖的程序，可以作为对其他水产养殖动物疾病预防程序的参考。但是，广大的水产养殖业者，要注意根据自己养殖的水产养殖动物种类以及希望预防疾病的流行特点，制定免疫多糖最佳的应用程序，而不能照搬本文的应用程序与方法。

用免疫多糖预防异育银鲫和鲤

疱疹病毒病的投喂程序

摘要：在人工养殖异育银鲫（Carassius auratus gibelio）和鲤（ Cyprinus carpio ）的饲料中添加适量的免疫多糖，制备成含有定量免疫多糖的饲料投喂养殖鱼类。在进入异育银鲫造血器官坏死症和鲤疱疹病毒病流行时期之前，连续投喂投喂添加有免疫多糖的鱼用免疫饲料28 d，在国内部分水产养殖现场的应用结果证明，能有效地预防养殖异育银鲫造血器官坏死症和鲤疱疹病毒病的发生。本文比较详细地介绍了采用免疫多糖预防异育银鲫和鲤的疱疹病毒病的情况，并且强调了对养殖鱼类病毒性疾病实施免疫预防的重要性，重点介绍了利用添加有免疫多糖的免疫饲料投喂养殖鱼类的程序，对于成功地预防养殖异育银鲫和鲤的疱疹病毒病的重要性。

关键词：免疫多糖；异育银鲫；鲤；免疫调节剂；造血器官坏死症；疱疹病毒病

随着养殖水体水温的逐渐升高，养殖鱼类疾病也随之进入高发季节了。如何防控养殖鱼类疾病，是水产养殖人必须面对和重视的问题。对于广大的水产养殖业者而言，要做到对患病养殖鱼类的各种疾病均做到采用药物有效地给予治疗，还是存在许多难以克服的困难的。将这些困难因素归纳起来，主要是难以在患病初期就及时发现已经收到病原生物感染的患病养殖鱼类、难以正确地诊断疾病和筛选、精准地使用治疗疾病的水产用兽药，即存在所谓“三难”问题。

首先，因为养殖鱼类是常年生活在养殖水体中的，水产养殖业者在对其投喂饲料后，养殖鱼类是否都能正常、及时地摄取投喂的饲料，水产养殖业者往往是难以清楚地知道的。因此，养殖鱼类在罹患某种疾病后的初期，或者在出现典型症状之前的潜伏感染阶段，水产养殖业者是不容易及时地发现养殖鱼类已经感染了某种致病生物的。

其次，能导致养殖鱼类发病的病原因素很多，而且致病因素也错综复杂。不仅有多种多样的致病性生物（包括植物性病原与动物性病原），可能导致养殖鱼类发生生物性疾病（biological disease），还有许多非生物性环境因子，也可能导致养殖鱼类发生所谓的非生物性疾病（abiotic disease）。对于既缺乏相关的专业知识，又缺乏必要的诊断仪器、设备条件的广大水产养殖业者，要正确地区分或者诊断养殖鱼类的每一种疾病，是存在诸多困难的。

其三，用于治疗养殖鱼类疾病的大多数水产用兽药，都是有可能诱导致病原生物产生耐药性（drug resistance）的，而且致病生物对药物耐药性的产生是持续进行着的。因此，即使人们能采用某一种质量完全相同的水产用兽药，严格地按照农业农村部要求制定的统一产品说明书中标注的相同用法用量，去治疗不同养殖区域某种养殖鱼类疾病时，也可能是难以获得同样的药物疗效的。这就是因为如果不知道致病生物对水产用兽药的敏感性，是难以真正做到“科学、精准”地使用任何水产用兽药的。

因此，长期以来我国在养殖鱼类疾病防控中，提倡的是“预防为主，防重于治”的方针。而在众多预防养殖鱼类疾病的措施中，根据养殖鱼类疾病发生的流行病学（epidemiology）基本规律，定期使用免疫调节剂（immunomodulator）对养殖欲裂进行疾病的预防，已经被国内、外的养殖鱼类病害研究者，用大量的试验研究结果证明，是行之有效的预防养殖鱼类疾病的重要措施。

本文在简要介绍水产用免疫调节剂的基本概念的基础上，重点介绍了我们采用免疫多糖，对危害养殖异育银鲫（Carassius auratus gibelio）的造血器官坏死症（图1），以及鲤（Cyprinus carpio）疱疹病毒病（图2）的免疫预防效果。旨在帮助水产养殖业者正确地使用免疫调节剂，预防养殖鱼类的各种疾病。

1异育银鲫和鲤疱疹病毒病的特征

1.1异育银鲫的造血器官坏死症

从2008年开始，江苏省盐城地区的养殖异育银鲫（Carassius auratus gibelio）开始流行由疱疹病毒（属于鲤疱疹病毒2型，Cyprinid herpesvirus 2， CyHV-2）引起的造血器官坏死症（水产养殖业者将这种疾病俗称为“鳃出血”）。流行病学调查结果证明，异育银鲫的造血器官坏死症，主要在每年的4~6月和8~11月初流行，其中在每年的5月和10月份分别出现两个流行高峰期。

每年当水温处于上升期时，异育银鲫造血器官坏死症流行的水温范围为15.0~28.0℃，即当池塘水温自然上升至15.0℃时，异育银鲫造血器官坏死症开始发生，而继续上升至29.0℃或者以上时，这种疾病就几乎停止流行。当水温进入下降期时，即使池塘水温尚处于28.0℃以上，异育银鲫造血器官坏死症也是可以发生的。

异育银鲫造血器官坏死症原本只是在江苏省盐城地区流行的一种恶性传染病，现在已经在全国养殖异育银鲫的地方均有发生了。对各地异育银鲫养殖业每年均有不同程度地流行与危害。该病一旦发生，造成的死亡率一般为30.0%~40.0%，严重时可达90.0％以上。如果养殖业者在疾病发生期间，采用错误的处理方法（如采取“致病先杀虫”的方法等）即可加速患病鱼体的死亡，甚至导致整个池塘中异育银鲫全部死亡的事例也是时有发生（图3）。

对于广大的异育银鲫养殖业者而言，现在就采取对异育银鲫造血器官坏死症的预防措施，对于减少因这种病害造成严重经济损失，是很有必要的。

1.2鲤疱疹病毒病

鲤疱疹病毒病的病原是锦鲤疱疹病毒（Koi herpesvirus，KHV），又称为鲤疱疹病毒3型（Cyprinid herpesvirus 3，CyHV-3）。

这种疾病于1997年在德国首次报道，一年后由美国科学家在以色列和美国的患病鱼类中分离并鉴定到这种病毒。现在这种危害养殖鲤的疾病，已经在世界上几十个国家有了其相关的报道。

患病鱼体显示出的典型临床症状是，反应迟钝、食欲不振、呼吸困难、常在水面或进水口处游动；鳃出血坏死，眼睛凹陷，头骨萎缩，皮肤有灰白色斑点（图2），黏液分泌增多；鳞片有血丝，体表无明显损伤，感染后第7~10d开始出现死亡，2~3周后死亡率可达100%。同池饲养的其他种类的鱼类，则不会受到感染、发病。

鲤疱疹病毒病多发于春、秋季。该病毒在细胞中增殖的最佳温度是20℃~25℃，高于30℃和低于4℃不能增殖，对温度的最低要求是10℃。但是，在不适宜的温度下，病毒也可能在细胞中持续存在，当再返回到适宜温度时，病毒基因的转录再次活化，产生细胞病变。

当水温为16℃~27℃时，鲤疱疹病毒病最容易暴发，根据水温变化的情况，该病潜伏期为7~21d左右。在13℃低温条件下，养殖鲤会感染这种病毒，但一般不会发病。若养殖鲤已感染了该病毒，水温位于18℃~27℃的时间持续越长，这种疾病暴发的可能性就越大。

病鱼最明显的受到损伤的部位是在鳃。感染后第２d，鳃薄片减少，并伴随炎性细胞浸润；第６d起鳃结构消失，鳃弓内血管充血，鳃耙变细。鳃的损伤早于其他组织（因此，在我国北方地区，水产养殖业者将这种疾病称为“急性烂鳃病”）。除了鳃以外，最主要的病变发生在肾。感染后第2d在肾小管周围出现炎性浸润；第6d出现严重的间质性炎症，并伴随着血管充血。随后炎症加重，并伴随有一些肾单位管状上皮细胞的轻微变性。另外，其他器官也出现不同的病变。肝实质出现轻微炎性浸润，脑组织切片显示局灶性脑膜和脑膜旁炎症。

鲤疱疹病毒病发病迅速，死亡速度快，给治疗带来了极大的挑战，一旦人们发现这种鱼病，至今能够采取的处理方法都是将患病鱼杀灭，切断病毒源。因此做好该病的预防工作具有重要意义。

由于 鲤疱疹病毒对温度敏感，因此保持水体温度恒定，适当控制水温在一定程度上可以防治鲤疱疹病毒病发生。同时向水体定期加入益生菌和定向营养剂，维持水质环境稳定，可以有效预防养殖鲤烂鳃病等常见细菌性疾病。

2预防养殖异育银鲫和鲤疱疹病毒病的免疫多糖投喂程序

2.1预防养殖异育银鲫疱疹病毒病的免疫多糖投喂程序试验与结果

我们曾经在江苏省射阳县黄沙港镇的裕达水产养殖场，在养殖池塘中设置网箱，完成了采用多种免疫多糖类物质预防养殖异育银鲫疱疹病毒病的试验（图4）。

将500尾来源相同、活泼无外伤的体重为（113.5±5.5）g的异育银鲫，仔细挑选后放在同一个网箱中饲养。在同一个池塘中放置的30个条件相同网箱，将7个网箱设置为投喂同一种免疫多糖类物质的1个试验组，在各组每个网箱中投喂不同剂量的含有免疫多糖类物质的饲料，在28个网箱中共投喂4种免疫多糖饲料，另设2个不投喂含有免疫多糖饲料的网箱，作为对照网箱。

试验期间温度变化在17.5~25.5℃之间，每天上午8:00、中午13:00和下午16:30各投喂饵料1次，投饵量以使异育银鲫达到饱足并有少量剩余为准。所用饲料为惠裕饲料科技有限公司生产的异育银鲫专用饲料。

根据各组试验异育银鲫的总体重，在定量的饲料中添加不同剂量的免疫多糖，制作成内含不同水平的免疫多糖的颗粒饲料后，分别投喂各组试验异育银鲫，即在Ⅰ~Ⅵ组的各7个网箱中，按照鱼体重投喂免疫调节剂的剂量分别为100 mg/kg、200.0 mg/kg、300.0 mg/kg、400.0 mg/kg、500.0 mg/kg、600.0 mg/kg和600.0 mg/kg。在余下的2个网箱中，投喂未添加免疫多糖的普通饲料作为对照组。每天投喂相当于鱼体重2.5%的饲料，连续投喂28 d。

投喂28d时间结束后，从试验和对照组网箱中随机各捞取50尾供试异育银鲫，放养在盛水2.0M3的圆形塑料水族箱中充气饲养。在每个水族箱中放置5尾体重300.0g左右的具有“鳃出血”典型症状的病鱼，与50尾供试鱼同居饲养2 d后将其捞出，将供试鱼继续饲养观察21 d。对在此期间死亡的异育银鲫进行解剖观察，判断是否由于感染“鳃出血”疾病而致死，统计各组的死亡率，依下式计算相对免疫保护率（Relative percent survival，RPS）。

免疫保护率（RPS）= [1-（免疫组死亡率/对照组死亡率）]×100

对照及试验鱼在与典型病鱼同居感染攻毒后，各组的死亡情况如表1所示。从表1 可以看出，经过投喂免疫多糖的异育银鲫均获得了一定的免疫保护率，而在饲料中添加免疫多糖的试验组异育银鲫死亡率明显的低于未添加免疫多糖的对照组，与对照组相比，当酵母免疫多糖在饲料中的添加量为500.0 mg/kg时，受免异育银鲫的获得了最高的免疫保护率。但是，各个添加酵母免疫多糖的试验组之间的免疫保护率则未出现显著性差别（t测验，P>0.05）。

表1 同居感染攻毒后异育银鲫的死亡率和免疫保护率

组别

攻毒银鲫尾数

死亡银鲫尾数

死亡率

免疫保护率

50

26

23

19

20

16

21

43

52.0

39.5

46.5

55.8

53.5

62.7

51.2

50

46.0

50

38.0

50

40.0

50

32.0

50

42.0

50

86.0

2.2在江苏省射阳县和辽宁省沈阳市辽中区投喂酵母免疫多糖预防养殖异育银鲫和鲤疱疹病毒病的结果

根据上述网箱内试验获得的结果，选择酵母免疫多糖作为预防养殖鱼类病毒病的免疫调节剂，添加在养殖鱼类饲料中制备成所谓“免疫饲料”。根据养殖鱼类病毒性疾病发生的时间，提前投喂养殖异育银鲫和鲤，预防养殖异育银鲫的造血器官坏死症和养殖鲤的鲤疱疹病毒病。结果证明，连续投喂免疫饲料28d，可以有效地预防病毒性疾病的发生。

根据我们在江苏省盐城地区，完成的对养殖异育银鲫造血器官坏死症流行病学调查结果，异育银鲫造血器官坏死症，主要在每年的4~6月和8~11月初流行，其中在每年的5月和10月份分别出现异育银鲫造血器官坏死症两个流行高峰期。

在每年3月底，异育银鲫造血器官坏死症进入流行期之前，开始投喂免疫饲料，预防第一个发病高峰，当水温进入下降期时，再继续投喂28d免疫饲料，可成功地预防第二个发病高峰到来的疾病。

预防养殖鱼类病毒性疾病的主要措施，就是采取能调节养殖鱼类机体免疫防御机能的方法。可以在其养殖鱼类的饲料中添加适宜的免疫调节剂（可以采取安琪酵母股份有限公司生产的酵母细胞壁、酵母水解物；北京英惠尔生物技术有限公司生产的酵母培养物等，根据水温的不同，在每吨饲料中添加4.0~5.0kg，水温低多添加、水温高时少添加），在每年开始投喂饲料时（在全国大多数地区大约是4月初，水温上升到12℃左右）和8月中旬（池塘水温开始下降以前20天左右），每次连续投喂添加有免疫调节剂的饲料28d左右。通过调节养殖鱼类自身的非特异性免疫机能，达到有效提高抵抗病毒性病原感染的能力。

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作者：华中农业大学 陈昌福，武汉科研时代生物技术有限公司 周鑫军

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