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不能但易于忽视的病原菌检测
撰文丨林盛张
前言
梭杆菌属是临床常见的革兰阴性杆菌，常寄生在人和动物口腔、上呼吸道、肠道及泌尿生殖道等部位的正常菌群，引起临床感染的以具核梭杆菌最为常见[1-3]。近年来，随着抗生素的广泛使用，梭杆菌属细菌的分离越来越多，梭杆菌属的致病性逐渐受到重视。具核梭杆菌常在口腔、生殖道和上呼吸道被发现,常引起牙周炎，导致血液、脑、胸、肺、肝脏、关节、腹部、产科和妇科的感染脓肿。也可引起妊娠并发症导致宫内感染。但是引起血流感染在国内尚属少见。
案例经过
患者为老年女性，急性病程，因“发热4天”入院。既往因左侧乳腺癌行手术治疗；入院时查体：T39.1℃，P98次/分，R21次/分，Bp96/55mmHg。神志清醒，咽无充血，左侧乳房缺失，左侧胸壁可见长约5cm陈旧性手术疤痕。两肺呼吸音粗糙，左侧肺可闻及湿罗音，右肺未闻及胸膜摩擦音，心律齐，未闻及杂音。腹部平软，全腹部无压痛及反跳痛。双下肢无水肿，神经系统检查未见异常。
辅助检查
尿常规提示：白细胞+-，尿蛋白1+，胆红素1+，余无异常。
血常规提示：单核细胞11.7%，余无异常。CRP70.45mg/l。
胸部CT提示：1.左乳腺综合治疗后 2.左肺下叶炎症可能性大。
心电图提示：1.窦性心律 2.左心室高电压 3.ST-T改变。
心脏超生提示：二尖瓣返流（少量），三尖瓣返流（少量），肺动脉高压（轻度），左室舒张功能降低。
腹部超生检查未见异常。入院行血需、厌氧菌培养。
血培养厌氧瓶28.5h报警阳性涂片转种，5ml注射器抽吸样本，转种哥伦比亚血平板（安图，批号20170215B）、麦康凯、巧克力平板（上海生物梅里埃公司，批号1005602790）、置厌氧袋于35℃ 5%CO2中孵育48小时后，血平板上生长不规则圆形，略突起、灰色、发光透明，如图1所示。并涂片经革兰染色镜检显示为革兰阴性、菌体呈梭状、两端尖细如图2所示。
图1 48h厌氧培养后具核梭杆菌菌落形态
图2 油镜下具核梭杆菌（孵育48h，放大1000倍）
采用VITEK MS型基质辅助激光解析飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）仪（法国生物梅里埃公司）鉴定为具核梭杆菌，可信度为99.9%。将菌株进行16S rRNA核酸测序，PCR引物合成及产物测序由北京六合华大基因公司完成。测序结果在NCBI GenBank（http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）中进行BLAST比对，待测菌株与具核梭杆菌（基因登录号：GG667131.1）的序列同源性达99.9%。
案例分析
本研究中的这株具核梭杆菌来自一位乳腺癌术后患者，该患者是乳腺癌术后急性发热4天入院，发病原因可能是患者由于术后经化疗后机体免疫力下降，造成体内微生态失衡，而具核梭杆菌具有很强的黏附能力，拥有一种对宿主粘附性很强的半乳糖限制性凝集素，黏附于宿主上皮细胞，再运用其外形细长的优势以拉链机制入侵宿主细胞内，导致内源性感染，侵入血液而引起血流感染[5-6]。
关于具核梭杆菌的药敏试验数据鲜少报道。文献报道该菌对甲硝锉、阿莫西林/克拉维酸、头孢西丁、亚胺培南、青霉素G的敏感性较高，对克林霉素耐药性较高[7-10]。本次分离到的具核梭杆菌β-内酰胺酶阳性，患者予以阿洛西林+左氧氟沙星抗感染治疗一周后患者症状好转。
知识拓展
具核梭杆菌是人和动物口腔、上呼吸道、肠道等部位的正常菌群，常引起口腔疾病，还可引起身体其它部位的感染，包括脑、肺、关节等，但血培养中分离到具核梭杆菌在国内鲜有报道，原因可能与基层医院的厌氧菌培养及鉴定尚未得到广泛开展有关。
具核梭杆菌鉴定可以采用传统的生化鉴定、MALDI-TOF MS或16S rRNA基因测序，传统的生化鉴定耗时长，而且常常不能准确的鉴定出来，16S rRNA是细菌鉴定的金标准，但是它耗时长且贵，不利于一般实验室的常规工作，MALDI-TOF MS对厌氧菌鉴定速度快，平均鉴定一个细菌只需要1分钟，而且成本低，能够快速鉴定细菌为临床治疗提供方向。但是MALDI-TOF MS在厌氧菌的鉴定方面也有一定的局限，对于蛋白波峰比较相近的细菌或者一些比较少见菌的数据库中还没有完善的数据，质谱还暂时不能鉴定，这需要不断升级数据库。
总结
近年来，随着抗菌药物的大量使用，具核梭杆菌的分离率越来越多其耐药性也逐年升高，单纯靠经验用药已无法得到满意的治疗效果，尤其是我国对抗菌药物应用的日益重视。目前临床已经意识到厌氧菌引起临床感染性疾病的重要性，所以开展厌氧菌培养的重要性不言而喻，开展厌氧菌药敏试验是我们今后工作的重点目标。
参考文献：
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本文来源丨检验医学网
责任编辑丨舒豪
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