Taq酶是分子实验中常用的试剂,被广泛的应用于分子诊断、动检、科学研究等领域。由于Taq酶在常温下也存在一定活性,PCR体系配制或PCR升温过程中,聚合活性可能会导致产生非特异扩增,5’ - 3’外切活性可能会造成引物/探针被切割,都会影响扩增结果,影响检测结果的准确性和稳定性。因此,抑制Taq酶在常温条件下的活性非常重要。

Taq酶抗体是进行Taq酶活性封闭的常用手段,在低温条件下能够封闭Taq酶的聚合活性和5’ - 3’外切活性,PCR过程中,Taq酶抗体会在高温变性的环节失活,释放Taq酶活性,从而达到热启动效果。

诺唯赞全新双封闭Taq酶抗体(Vazyme #P141)

诺唯赞推出全新双位点封闭Taq酶抗体Vazyme #P141,对Taq酶的聚合活性和5’ - 3’外切活性结构域具有高亲和力,能够显著提升扩增特异性,复孔重复性,以及低模板检出稳定性。

产品性能

更高的封闭率

将引物和单链模板,分别与未封闭、单位点封闭以及双位点封闭抗体封闭的Taq酶混合,55℃实时监测SYBR的荧光值(图1),以此反应Taq酶聚合活性的封闭情况。将引物、探针分别与未封闭、单位点封闭以及双位点封闭抗体封闭的Taq酶混合,55℃实时监测探针被切割后的荧光信号值(图2),以此反应Taq酶5' - 3'外切酶活性的封闭情况。结果显示,双位点封闭抗体P141能够很好的封闭Taq酶的聚合活性以及5' - 3'外切酶活性。

图1. 不同抗体封闭Taq酶后,检测SYBR荧光值变化

图2. 不同抗体封闭Taq酶后,检测被切割的探针荧光值变化

0更高的特异性

选择低模板检出不佳的2个体系,使用P141及同类产品Supplier A、B进行Taq酶封闭,分别使用封闭后的Taq酶及裸Taq进行扩增。结果显示,P141封闭后的Taq酶,扩增平台值更优,说明P141能够更好的对Taq酶的活性进行封闭,可以有效的提高体系的特异性(图3)。

图3. qPCR检测不同抗体封闭后的Taq酶扩增情况

酶活可快速释放

分别用P141、同类产品Supplier A、B、裸Taq酶,在95℃下热激30 sec,检测酶活。结果显示95℃热激30 sec后,P141封闭后的Taq酶可释放95%以上的酶活,与同类产品Supplier A、B相当。

表1. 不同抗体封闭Taq酶,热激后酶活的释放情况

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(诺唯赞)