大肠杆菌发酵中的噬菌体污染

(一)噬菌体的特性

噬菌体具有极其专一的寄生性,它仅仅能够在特定的宿主细胞内部进行生长和繁殖,而且必须是处于活跃的、正处于繁殖阶段的细胞。不仅如此,噬菌体的不耐热性表现得尤为突出,游离状态下的噬菌体在 45℃的条件下仅仅 10 分钟就能够失去活性。此外,噬菌体对于常见的药物没有耐药性,直接在其表面喷洒 1%新洁尔灭、75%酒精、1%双氧水、5%的甲醛等各类消毒制剂,均可以迅速使其失去活性。

(二)噬菌体感染的原因

菌种本身携带噬菌体的情况时有发生,特别是溶源性噬菌体,如果未能及时察觉并且舍弃使用此类菌种,那么引发噬菌体感染的可能性极高。

发酵车间所处的环境中存在的噬菌体能够随着空气流动而进入发酵罐,从而造成污染。虽然发酵罐配备了空气过滤器,然而这种过滤器依旧无法做到完全拦截空气中所有的噬菌体。

罐体、管道在清洗和消毒方面如果做得不彻底,或者经过长时间的使用之后,存在管道顽固性生物膜再次污染的状况。

车间管理方面存在着一定程度的疏忽,一部分人员错误地认为发酵仅仅与发酵车间有关联,各个部门之间缺乏密切的配合,人员的预防意识相对薄弱,并且未能长期坚持不懈地采取有效的预防措施。

(三)噬菌体感染后的现象

  • 发酵液的光密度会出现显著的异常变化。通常情况下,光密度先是呈现出上升的趋势,而后会逐渐下降;有时候甚至根本不会上升,如果人为接入1%的噬菌体,光密度则始终处于最低的位置。

  • pH 值会逐步上升,一般升到 7.5 之后便不再下降。

  • 糖和氨的消耗变得缓慢,甚至有可能完全停止。

  • 通过镜检能够发现菌体数量明显减少、形态发胖,经过革兰氏染色后会呈现出红色的碎片。在情况严重的时候,菌体可能会出现拉丝或者网状的形态,甚至呈现出鱼刺状,几乎难以观察到完整的菌体。

  • 使用含有噬菌体的发酵液滴在平板上,能够清晰地观察到噬菌斑。

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