限制性诱发的非条件性恐惧实验（Restraint induced unconditioned fear）是一种用来评估小鼠对急性应激反应的实验方法。Scruff restraint（颈部抓握限制）是一种常用于小鼠的实验操作，用于模拟捕食者捕食时的束缚状态，从而诱发小鼠的应激反应。这种实验方法可以了解小鼠在经历捕食者威胁模拟的应激后的行为变化，以及这些变化如何与它们的生理和心理状态相关联，对于研究应激反应、焦虑、恐惧以及相关的神经生物学机制。
1. 实验时间：所有小鼠在上午10:00至下午1:00之间进行测试。首先将小鼠放入一个活动监测室中，以评估其基础的物理活动。
2. 限制操作：使用拇指和食指抓住小鼠的颈部皮肤（称为“颈部抓握”）。将小鼠的尾巴放在第四和第五个手指之间。这种限制操作模拟了捕食者捕获猎物时的束缚，是一种常见的诱发恐惧反应的方法。
3. 释放：限制10秒后，将小鼠释放到一个观察箱中。完成颈部抓握限制后，将小鼠再次放入一个干净且消毒过的活动监测室中，以评估其物理活动。
4. 观察箱环境：观察箱内照明为20勒克斯，这是一个相对较暗的环境，可以减少小鼠的应激反应。
5. 视频记录：从箱顶的摄像头捕捉小鼠的行为视频，持续10分钟。
6. 行为测量：监测小鼠在经历颈部抓握限制后的物理活动，因为这种应激可能会影响小鼠的活动性。
总移动距离：测量小鼠在10分钟内移动的总距离。
静止时间：测量小鼠在10分钟内静止不动的时间。
7. 僵直反应：完全不动（除了呼吸）被视为僵直反应。这是小鼠对潜在威胁的一种自然防御机制。
9. 量化僵直：僵直反应被量化为小鼠每秒移动<0.5厘米（2厘米）的时间。
10. 恐惧反应：通过这种急性应激诱发的非条件性恐惧反应，表现为10分钟记录期间的持续性静止（僵直）。
注意事项：
在小鼠被放入活动监测室之前，确保监测室是清洁和消毒的，以避免小鼠之间通过气味交流，影响实验结果。小鼠在经历应激后，其活动可能会受到其他小鼠气味的影响，特别是对于mdx小鼠（一种杜氏肌营养不良症模型小鼠），因此需要特别注意环境的清洁。
Fig1 限制性诱发的非条件性恐惧实验相关评估实验
文献引用：
Hasegawa J, Nagata T, Ihara K, Tanihata J, Ebihara S, YoshidaTanaka K, Yanagidaira M, Ohara M, Sasaki A, Nakayama M, Yamamoto S, Ishii T, IwataHara R, Naito M, Miyata K, Sakaue F, Yokota T. Heteroduplex oligonucleotide technology boosts oligonucleotide splice switching activity of morpholino oligomers in a Duchenne muscular dystrophy mouse model. Nat Commun. 2024 Sep 26;15(1):7530.
Lindsay, A., Russell, A.P. The unconditioned fear response in dystrophindeficient mice is associated with adrenal and vascular function. Sci Rep 13, 5513 (2023).
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