BSA-Sepharose beads，即牛血清白蛋白偶联琼脂糖珠，是一种重要的实验工具，广泛应用于生物化学和分子生物学研究中。以下是对其的详细介绍：

一、基本概念

  • 名称：BSA-Sepharose beads，又称牛血清白蛋白偶联琼脂糖珠。
  • 组成：由牛血清白蛋白（BSA）和琼脂糖珠（Sepharose beads）通过偶联反应制得。

二、制备过程

  1. 琼脂糖珠活化
    • 使用NHS-活化的琼脂糖珠或氰溴化物（CNBr）进行活化。
    • 对于NHS-活化的琼脂糖珠，按照厂商说明进行操作。
    • 对于CNBr活化，需要在碱性条件下（如1M NaOH）处理琼脂糖珠，然后用冰冷的CNBr溶液进行活化。
  2. 偶联反应
    • 将BSA溶解在适当浓度的PBS缓冲液中。
    • 将溶解后的BSA加入到活化的琼脂糖珠中，混合均匀。
    • 反应混合物在4°C下旋转反应4至16小时，以确保BSA与琼脂糖珠充分偶联。
  3. 封闭未反应位点
    • 加入适量的乙醇胺或其他封闭剂，继续反应1至2小时，以封闭未反应的活化位点。
  4. 洗涤与保存
    • 使用PBS缓冲液反复洗涤偶联后的琼脂糖珠，去除未结合的BSA和其他反应副产物。
    • 洗涤后的BSA琼脂糖珠悬浮在PBS中，添加0.02%的叠氮化钠作为防腐剂。
    • 在4°C保存备用。

三、特性与应用

  1. 特性
    • BSA具有良好的稳定性和低免疫原性，确保了偶联琼脂糖珠的长期稳定性和低毒性。
    • BSA具有低非特异性结合特性，减少了非特异性背景信号，提高了实验的特异性和准确性。

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