支原体是一种大小介于细菌和病毒之间的微生物，它们能够在细胞培养环境中悄然滋生并造成严重危害。在细胞培养过程中，支原体污染可能导致细胞形态改变、生长速率异常、代谢功能紊乱等问题，进而影响实验结果的准确性和可靠性。更为严重的是，支原体污染可能会在实验室中传播，危及其他细胞培养物和实验的进行。目前，支原体污染已成为细胞培养领域面临的一个严峻挑战，亟待有效的解决方法。

一、支原体污染现象

  • 细胞形态变化轻微：在支原体污染初期，细胞的外观形态变化并不十分明显，高倍显微镜下可能会观察到细胞内有细小的黑色颗粒。

  • 培养液特性改变：虽然培养液不会出现浑浊现象，但 pH 值会发生明显变化，通常颜色会变黄，且这种变化在更换培养液后的几小时内就可能出现。

  • 细胞生长异常：随着污染时间延长，细胞的生长速率会受到影响，表现为增殖缓慢，严重时细胞甚至会从培养器皿上脱落。

二、支原体污染原因

  • 外部引入：

    • 人员因素：细胞培养操作人员的口腔、皮肤等可能携带支原体，在操作过程中如果不严格遵守无菌操作规范，就容易将支原体带入细胞培养环境。

    • 器材污染：实验所用的器材，如培养皿、移液器、吸头、过滤器等，如果未经严格的灭菌处理或在储存、运输过程中受到污染，就会成为支原体的污染源。

    • 培养基问题：培养基以及其中添加的血清等成分，如果质量不合格或在制备、储存过程中受到污染，也会引入支原体。

  • 细胞间交叉污染：在细胞培养过程中，不同细胞系之间的交叉污染是支原体传播的一个重要途径。例如，在使用同一套培养器材或在同一培养空间内操作不同细胞系时，可能会导致支原体从一个细胞系传播到另一个细胞系3。

为此，润联推出了针对细胞间支原体污染的整体解决方案。

  • 十年行业的经验积累；

  • 专业齐全的验证文件；

  • 高效快速解决实验室细胞间支原体污染；

  • 环保、安全、无毒、无害；

三、欧菲姆KV BOX微型灭菌仪技术原理及优势

（一）技术原理

KV BOX 采用先进的过氧化氢汽化技术，将过氧化氢溶液转化为微小的气态颗粒。这些气态颗粒能够迅速弥漫到整个空间，包括细胞培养设备的内部、表面以及周围环境。通过过氧化氢的强氧化性，能够破坏支原体的细胞壁、细胞膜和核酸等结构，从而实现高效的灭菌效果。

（二）优势

  1. 高效杀菌

    • KV BOX 对支原体具有卓越的杀灭能力，能够有效清除包括支原体在内的多种微生物，如细菌、病毒、真菌等。其杀菌效果经过严格的实验验证，可达到极高的杀灭率，为细胞培养提供可靠的无菌环境。

  2. 全面覆盖

    • 凭借独特的汽化扩散方式，KV BOX 能够深入到细胞培养设备的各个角落，如培养箱的缝隙、生物安全柜的风道等传统消毒方法难以触及的部位，确保无死角消毒，彻底消除支原体的藏身之处。

  3. 快速便捷

    • 整个消毒过程耗时短，能够在较短的时间内完成对细胞培养环境的全面消毒。这不仅提高了实验室的工作效率，还减少了因设备停机消毒而导致的实验延误，为科研工作的顺利进行提供了有力保障。

  4. 安全环保

    • 过氧化氢在消毒后分解为水和氧气，无残留有害物质，对细胞培养物、实验人员和环境均安全无害。同时，KV BOX 在运行过程中噪音低，不会对实验室的正常工作秩序造成干扰。

  5. 操作简便

    • 设备设计人性化，操作界面简洁易懂，操作人员只需经过简单的培训即可熟练掌握使用方法。此外，KV BOX 还具备智能化的监控系统，能够实时监测消毒过程中的各项参数，确保消毒效果的稳定性和可靠性。

三、欧菲姆KV BOX微型灭菌仪在支原体污染处理中的应用流程

（一）准备阶段

  1. 清理细胞培养区域

    • 将细胞培养设备内的细胞培养物、培养基、试剂等物品移出，放置在安全的地方。同时，清理培养箱、生物安全柜等设备内部的杂物和残留物质，如纸屑、灰尘等。

  2. 检查设备状态

    • 确保细胞培养设备如培养箱、生物安全柜等处于正常工作状态，关闭设备的通风系统和电源。检查 KV BOX 设备及其附件是否完好无损，过氧化氢溶液是否充足。

（二）消毒阶段

  1. 放置 KV BOX 设备

    • 根据细胞培养区域的大小和布局，合理放置 KV BOX 设备，确保其能够均匀地向周围环境释放过氧化氢气体。一般情况下，将设备放置在房间的中央位置或靠近主要的细胞培养设备处。

  2. 启动消毒程序

    • 确认一切准备就绪后，启动 KV BOX 设备的消毒程序。设备将自动开始将过氧化氢溶液转化为气态，并均匀地释放到周围环境中。在消毒过程中，操作人员应离开现场，避免接触过氧化氢气体。

（三）静置阶段

  1. 消毒完成后，KV BOX 设备将自动停止运行。此时，不要立即打开细胞培养设备或进入消毒区域，应让设备和环境静置一段时间，以使过氧化氢气体充分作用于支原体和其他微生物，确保消毒效果的彻底性。

  2. 静置时间一般为 30 分钟至 1 小时，具体时间可根据消毒区域的大小、通风情况以及支原体污染的程度等因素进行适当调整。在静置期间，应保持消毒区域的封闭状态，避免外界空气的流入。

（四）通风阶段

  1. 静置结束后，打开细胞培养设备的通风系统以及房间的门窗，进行通风换气。通风时间应足够长，以确保将残留的过氧化氢气体排出室外，恢复室内空气的正常质量。

  2. 在通风过程中，可使用风扇等设备加速空气流通，提高通风效率。同时，操作人员应注意观察通风情况，确保室内无过氧化氢气体残留气味后再进入。

（五）检测与验证阶段

  1. 通风完成后，为了确保支原体污染已被彻底清除，需要对细胞培养环境进行检测。可采用支原体检测试剂盒或专业的检测机构进行检测，检测样本包括细胞培养设备表面、空气、培养基等。

  2. 如果检测结果显示支原体仍存在或消毒效果不理想，应分析原因并重新进行消毒处理。可能的原因包括消毒参数设置不当、设备故障、消毒区域未完全封闭等。在重新消毒前，应针对问题进行相应的调整和解决。

  3. 当检测结果确认支原体污染已被成功清除后，可对细胞培养设备进行清洗和消毒，然后重新放入细胞培养物，恢复正常的实验工作。

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