最近各个课题组都热衷于搞多能干细胞研究，师门的兄弟姐妹被卷得满面愁容……
师门精英群（5）
师弟
你们听说了么？隔壁组做的干细胞一区文章已经见刊。
师兄
一个月汇报进度了，iPSC 一电就死，转染不了一点。
大师姐
用 Lipofectamine Stem 也可以转，效果不错的。
师兄
iPSC 也可以用脂质体转染啊？
大师姐
是的，我最近搞到一套干细胞实操手册（5本），里面介绍 iPSC 更适合用脂质体转染，电转更适合造血干细胞。
师弟
太好了，我的神经干细胞这几天总聚团生长，这就去看看怎么解决！
为了帮助大家做好干细胞相关实验，我们为大家整理了一套全面的「干细胞实操手册」，从基础培养、基因编辑、疾病模型到临床转化都有超详细的步骤介绍，细节满满，识别二维码免费领取全套干细胞实操手册，还有无线蓝牙耳机、米家自动洗手仪、充电宝、公牛夜灯、京东卡等120 份精美礼品相送，先到先得
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培养效率 up up up
《全套干细胞实操手册-5 本》，长达近 300 页，不光介绍了常用的干细胞重编程、培养、转染、分化和鉴定以及各种神经细胞培养分化的 protocol，包含细胞分析的步骤和流程。也有各种疑难问题的解决方案，如干细胞转染后活力低、转染效率低这类疑问都能在手册中找到解答。还提供了多能干细胞（PSC）在悬浮培养系统中扩增需要考虑的关键因素及可以采用的方法。
另外，如果你还对进阶的干细胞实操问题感兴趣：如何通过 PSC 的基因组编辑实现复杂遗传疾病模型构建？如何用最简洁高效的方法构建当下热门的心脏疾病和帕金森疾病模型？如何在 3D 环境中实现 PSC 的高效扩增？如何大规模扩增出支持细胞治疗的 PSC？这本手册，从基础研究到临床转化，都提供了全面细节的操作指南！
手册精彩内容抢先看～
干细胞转染后活力低、转染效率低
1. 根据不同的细胞类型选择转染方式
● 对于诱导多能干细胞、胚胎干细胞、神经干细胞和间充质干细胞，推荐使用 Lipofectamine Stem 转染试剂。
● 对于造血干细胞，更推荐使用 Neon 电转染系统
2. 在转染过程中，干细胞的增殖需要一定的空间。因此，需要接种合适的细胞数量，以便转染当天达到 30%～60% 汇合度。
3. 减少 DNA、mRNA 或 RNP 复合物的用量可提高表达效率，同时最大程度地降低因外源分子过量导致的细胞毒性和脱靶效应。
不同的干细胞转染系统实验条件如何设置？如何优化转染方案？更多干细胞转染技巧和方法指南都在《干细胞实操手册》中，赶紧点此免费领取吧！
神经干细胞培养过程中易形成团块
1. 形成原因：在常规 NSC 分化中，细胞会过度生长，并由祖细胞（SOX1）和分化的神经元（MAP2）的混合群体组成。祖细胞的过度生长将导致团块形成，如果培养时间延长，会导致细胞从培养板上脱落。
2. 解决方案：在神经元分化培养基中添加CultureOne 添加剂，消除 NSC 分化中的祖细胞。同时可将细胞死亡率降至最低，并且对激酶介导的途径无影响。所产生的均匀分布的、分化的神经元可改善下游分析，加速神经元成熟并可维持培养 5 周或更长时间。
如何通过 PSCs 诱导分化的 NSC 进一步获得神经细胞？如何进行神经元功能和细胞健康检测？实验方案均可在《干细胞实操手册》中查看，还有心肌细胞分化和定形内胚层分化实验方案，满足不同领域研究需求，点此领取手册。
如何评估 iPSC 的分化潜能
分析 iPSC 并确认存在自我更新的基因产物或不存在亲代体细胞基因产物至关重要，但还不足以确认新获得的 PSC 细胞系的功能多能性。另一个关键检测是确认三系潜能或 iPSC 能够分化为三个胚层的细胞：外胚层、中胚层和内胚层。这可以通过检测体内的畸胎瘤形成或培养物中的拟胚体（EB) 形成（更常见）来完成。
1. 细胞分析
分析拟胚体分化的常见标志物包括：
● 中胚层的平滑肌肌动蛋白（SMA）
● 内胚层的 α-甲胎蛋白 (AFP)
● 外胚层的 β-III 微管蛋白（TUBB3/TUJ1）
2. 分子分析
使用 qPCR 技术一次对多种干细胞分化标志物进行定量分析，可作为细胞数据的补充。
相关的细胞染色、流式细胞术样本收集、PCR 实验分组等关键步骤注意事项，已在《干细胞实操手册》进行了详细介绍，点此领取手册。
干细胞培养难度大，如何实现高效大规模的扩增
多能干细胞（PSC）在多种疾病的细胞治疗领域已展现出了极大的潜能，但要实现其在细胞治疗生产应用的需求，首先面临的挑战就是 PSC 的可扩展高效扩增。为此，研究人员开发出CTS StemScale PSC 悬浮培养基，这是一种无异源动物成分的培养基，支持在悬浮培养中稳健扩增 PSC。
图 1. 使用 CTS StemScale PSC 悬浮培养基启动可规模放大的小规模培养的简化工作流程
如何可靠的将干细胞治疗向临床应用转化？在进行 PSC 大规模扩增生产时，如何设置关键的实验参数？以上问题的答案，都能在《干细胞实操手册》获取详细方案，点此领取手册！
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内容策划：王丹琦
内容审核：吴军
题图来源：图虫创意
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