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新物体识别测试（Novel Object Recognition Test, NOR）是一种用于评估动物认知记忆能力的行为学实验。 在这个测试中，动物被放置在一个环境中，其中包含两个物体，其中一个是熟悉的，另一个是新的。 动物对这两个物体的探索行为被记录下来，以评估它们对新物体的识别记忆能力。 斑马鱼的新物体识别测试是一种行为实验，用于评估它们的记忆能力，尤其是对新物体的识别记忆。 NOR测试旨在评估斑马鱼对新物体的识别能力，从而推断它们的记忆保持能力。 对新物体的偏好探索表明了良好的记忆功能，因为它们能够区分新物体和熟悉的物体。 NOR测试是一种非激励性的测试，通常在没有外部刺激的情况下进行，这使得它成为评估动物自然认知能力的有用工具。
水槽：玻璃水槽，容量为20升，尺寸为30×30×30厘米。水深：6厘米，通常使用来自斑马鱼原生活环境的水。
NOR测试步骤：
1. 习惯阶段（Habituation Phase）
持续时间：5分钟
频率：每天两次
间隔：两次习惯阶段之间相隔5小时
持续天数：共三天
在这个阶段，斑马鱼被放置在一个没有任何物体的玻璃水槽中，让它们适应实验环境，减少对新环境的焦虑和探索行为。
2. 训练阶段（Training Phase）
时间：第四天
持续时间：10分钟
在这个阶段，水槽中放入两个相同的熟悉物体（例如，两个硬塑料红色立方体），让斑马鱼进行探索。这有助于建立对这些物体的初步认识。
3. 测试阶段（Test Phase）
时间：训练阶段后1小时
持续时间：10分钟
将其中一个熟悉的物体（FO，例如红色立方体）替换为一个新物体（NO，例如绿色立方体），观察斑马鱼对这两个物体的探索行为。新物体识别记忆通过比较鱼探索新物体和熟悉物体的时间来评估。
使用玻璃水槽（20升，30×30×30厘米），并用6厘米水填充。NOR测试有三个阶段。在习惯阶段，每条鱼在没有物体的情况下探索水槽5分钟，每天两次（两次习惯阶段之间间隔5小时），持续三天。在第四天（训练阶段），动物们探索放置了两个相似物体（两个熟悉的相同硬塑料红色立方体物体）的水槽10分钟。在测试阶段（训练阶段后1小时），一个熟悉的物体（FO，红色立方体）被一个新物体（NO，绿色立方体）替换，评估每条鱼对每个物体的探索时间10分钟。探索区域通过增加物体区域的尺寸来确定；因此，当鱼至少距离物体两侧2.5厘米时，即为在探索。所有数据都使用ANYMaze软件进行完全分析，遵循探索时间（s）和偏好百分比（探索NO的时间/探索FO的时间 + 探索NO的时间 × 100）进行。
探索的评估标准：
探索：当斑马鱼至少距离物体两侧2.5厘米时，认为是在探索该物体。
数据分析：记录和分析斑马鱼的探索时间。
探索时间比较
指标：比较斑马鱼探索新物体（NO）和熟悉物体（FO）的时间。
正常记忆功能：如果斑马鱼对新物体的探索时间显著长于对熟悉物体的探索时间：这表明它们能够有效地记住熟悉物体，并识别出新物体，是良好记忆功能的体现。
记忆障碍：如果探索新旧物体的时间没有显著差异，这可能表明记忆功能受损。
高偏好百分比：一个高偏好百分比（例如，超过50%）表明斑马鱼对新物体的探索时间占总探索时间的一半以上，这通常被视为良好记忆能力的指标。
低偏好百分比：如果偏好百分比接近50%或更低，这可能意味着斑马鱼对新旧物体的探索没有显著差异，可能表明记忆识别能力受损。
实验条件的影响：
环境因素：考虑水温、光照和水槽环境等变量，因为这些因素可能影响斑马鱼的行为。
实验时间：探索行为可能受测试时间（一天中的时间）的影响。
观察斑马鱼的自然行为，如游泳模式、互动等，这些行为可能影响探索活动。注意任何异常行为，如过度的焦虑或活动过度，这可能影响测试结果。
参考文献：
Capatina L, Napoli EM, Ruberto G, Hritcu L. Origanum vulgare ssp. hirtum (Lamiaceae) Essential Oil Prevents Behavioral and Oxidative Stress Changes in the Scopolamine Zebrafish Model. Molecules. 2021 Nov 23;26(23):7085.
Tan JK, Nazar FH, Makpol S, Teoh SL. Zebrafish: A Pharmacological Model for Learning and Memory Research. Molecules. 2022 Oct 30;27(21):7374.
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