Western blot 之制胶技巧，易翻车点及其解决方法汇总|sds|凝胶|制胶技巧|实验|玻璃板|试剂|酒精

来源：丁香实验

说到 WB 制胶，相信很多同志都有说不尽的翻车故事。

俗话说的好，工欲善其事必先利其器，SDS PAGE 凝胶就是我们做 WB 要利的器，因为高质量的胶是跑出漂亮条带的重要前提之一。

今天我们就来探讨一下制胶这个事。

一、SDS PAGE 凝胶制备

1、玻璃板梳子的清洁先用自来水浸泡 5 分钟，洗洁精清洗，注意厚玻璃板两侧沟槽容易残留胶，可以用尖锐的东西轻刮，然后用自来水冲洗干净泡沫，再用纯水冲洗即可，37 度烘干或者吹风筒吹干，注意别用热风长时间近距离吹，厚玻璃板两侧的边条是用粘胶粘在一起的，高热会使粘胶融化，久而久之可能引起密闭性不良甚至边条脱落。

2、制胶试剂准备超纯水，30% 丙烯酰胺，pH8.8Tris-HCl，pH6.8Tris-HCl，10%SDS，10% 过硫酸铵（APS），TEMED，还有 95% 酒精（压胶用）。

注意试剂的有效期，是否澄清透明，若有沉淀或晶体析出，请更换。30% 丙烯酰胺注意避光 4 度保存。pH8.8Tris-HCl 和 pH6.8Tris-HCl 容易出现沉淀，另外注意这两个试剂有两个浓度的，分别是 1.0M 和 1.5M，根据你的配方表来买。10%SDS 低温（4 度以下）时容易结晶析出。

APS 化学性质活泼，常温下暴露于空气下容易变质失效，一般建议配好后分装冻于-20 度冰箱。TEMED 气味恶臭，挥发性强，具有神经毒性，使用时屏住呼吸，在通风的环境下使用，注意密闭避光保存于 4 度。

3、制备分离胶

按照配方表依次加入相应体积的试剂（1.0 mm 玻璃板一块胶总体积 5.0 ml，1.5 mm 玻璃板一块胶总体积 7.5 ml 足矣），加完 SDS 后加 APS 前可以先混匀，然后迅速加入 APS 和 TEMED, 马上混匀（手摇或者振荡器摇匀），灌胶，注意胶的高度，要留有足够的空间给压缩胶，一般压缩胶的深度要求是梳子下缘再往下 1 厘米左右。然后用 95% 酒精压胶，注意加酒精时要缓缓注入，并且要边加边移动枪嘴，以免酒精在同一位置冲出一个凹陷。室温静置 25 分钟。

4、制备压缩胶及插梳子

先判断下层胶是否已经凝固，然后倒掉酒精，再用吸水纸吸干残余酒精，注意纸不能戳到胶面。然后按步骤 3 操作，混匀上层胶试剂后迅速灌胶，可以直接倒，但要注意别倒多了导致其他玻璃板不够，然后迅速插梳子，一次性操作，不可拔出再插。室温静置 20 分钟。

5、凝胶的暂存

根据剩余在离心管中的上层胶是否已经凝固来判断玻璃板中的。

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