siRNA转染是分子生物学常见的实验之一。在siRNA转染实验中,siRNA转染试剂的选择尤为关键。目前,实验室常用的siRNA转染试剂主要有赛默飞的Lipo3000、 RNAiMAX和上海星启的Starvio。其中,RNAiMAX是国际公认的siRNA转染试剂权威产品,Starvio是海归科学家研发的国产知名siRNA转染试剂,拥有数百篇SCI论文加持,很多实验室反应其转染性能非常优异。RNAiMAX价格昂贵,在关税战的影响下,其价格可能进一步上调,一般研究者无力承受,而Starvio价格只有RNAiMAX的四分之一左右,价格优势明显。与RNAiMAX比较,Starvio的siRNA转染性能究竟如何,我们实验室进行了比较系统的研究。

一、siRNA转染性能

siRNA转染性能,无疑是评价一款siRNA转染试剂实力的首要指标。不仅要看转染阳性率,更要看基因沉默效率。

我们实验室按照两款试剂的说明书,以24孔板的推荐比例,在用于做体外质控的Hela细胞融合度达到30-50%时,分别以1.5μL的Starvio和1.5μL的RNAiMAX转染试剂配制转染复合物进行转染,48h在荧光显微镜下观察其转染阳性率。结果显示,两者的转染阳性率都可达90以上,说明同等量的转染试剂,Starvio与RNAiMAX的转染阳性率不相上下。

如果说转染阳性率只是一个直观的结果,并非是验证两者转染性能的“金标准”,那么还需要通过RT-qPCR来检测其基因沉默效率从而得出结论。为此,我们将能够敲降SSB基因的小干扰核酸分别通过Starvio和RNAiMAX转染进Hela细胞,利用RT-qPCR检测转染24h后SSB的mRNA表达水平。如图所示,使用RNAiMAX转染的实验组CT值分别为21.91、21.95,使用Starvio实验组的荧光定量检测结果相比于RNAiMAX略高出0.13-0.14个CT值,两者结果非常相近,表明Starvio和RNAiMAX转染siRNA沉默基因的效率基本一致。

二、细胞毒性

细胞死亡率对细胞转染实验结果的影响很大,尤其是我们在研究基因沉默效率时,死亡细胞的那部分也会表现为目标mRNA表达水平的降低,因此siRNA转染试剂必须对细胞作用温和,才能实现实验结果的准确性与可靠性。

Starvio使用了新型可降解纳米材料,细胞毒性极低,并且成分上区别于以阳离子脂质体为主要成分的RNAiMAX。众所周知,siRNA转染试剂的毒性越低,其要求的转染密度也越低。在这方面,无论是RNAiMAX,还是Starvio,都做到了转染密度在30-50%时就能取得高效的转染结果。根据我们实验室的数据,使用RNAiMAX转染Hela细胞后,细胞死亡率约为10%左右,使用Starvio转染Hela细胞后,细胞死亡率只有5%左右,似乎还略优于RNAiMAX。可以说,Starvio在细胞毒性方面的表现是令人惊喜的。

三、操作简便性

以研究者的角度出发,实验的简便性也十分重要。主要看两方面,一方面是需不需要特殊培养基,第二方面是需不需要换液。

RNAiMAX的说明书中明确指出,需要使用Opti-MEM减血清培养基来稀释转染试剂和siRNA,而试剂盒内并不提供这种培养基,因此实验者需要额外购买Opti-MEM。Starvio试剂盒内配置有专研的转染增强剂,可用其稀释转染试剂和siRNA,不需要研究者再额外购买Opti-MEM,而且转染增强剂还可以提高siRNA转染效率。

在换液问题上,Starvio不仅有很强的抗血清干扰能力,不需在转染前更换无血清培养基,而且由于对细胞毒性极低,因此也无需在转染4-6h后进行换液。RNAiMAX同样在说明书中表明无需换液,但有些科研者在分享转染经验时还是建议转染后4-6小时最好更换培养液,可能对于一些敏感的细胞如果不及时更换新鲜的培养基,细胞死亡率还是比较高的。

显然,Starvio在使用上更为方便,不需要额外购买特殊培养基,也不需要在转染4-6小时后换液。

综合看来,Starvio在siRNA转染性能方面与RNAiMAX近似,在细胞毒性方面略优于RNAiMAX,在使用便利性方面则显著优于RNAiMAX,在siRNA转染方面可完全替代RNAiMAX。在美国政府高筑关税围墙,意图限制我国科技创新的大背景下,Starvio将会受到越来越多研究者的认可,最终成为国内siRNA转染领域的主导品牌。