齐岳生物提供定制的荧光素PEG巯基,FITC-PEG-SH
合成与纯化方法
1. 合成路线
荧光素PEG羧基(FITC-PEG2000-COOH)的制备:
通过FITC的异硫氰酸酯基与NH₂-PEG2000-COOH的氨基反应,生成FITC-PEG2000-COOH。
反应式:
FITC + NH₂-PEG2000-COOH → FITC-PEG2000-COOH + HSCN
巯基引入:
硫辛酸修饰法:FITC-PEG2000-COOH与硫辛酸(LA)的NHS酯(LA-NHS)反应,生成含二硫键的中间体,再通过DTT还原得到FITC-PEG2000-SH。
反应式:
FITC-PEG2000-COOH + LA-NHS → FITC-PEG2000-S-S-LA + CO₂ + H₂O
FITC-PEG2000-S-S-LA + DTT → FITC-PEG2000-SH + DTT-disulfide + LA-SH
直接巯基化法:FITC-PEG2000-COOH与2-亚氨基硫烷盐酸盐(Traut's Reagent)反应,直接引入巯基。
2. 关键试剂与条件
硫辛酸修饰法:
试剂:LA-NHS(1.2 equiv.)、DIPEA(三乙胺),DMF,室温反应24小时;DTT(10 equiv.),pH 7.4 PBS,37℃反应2小时。
后处理:透析(MWCO 3500 Da)去除副产物,冻干得到黄色固体。
Traut's试剂法:
试剂:Traut's Reagent(2 equiv.),pH 8.0硼酸缓冲液,室温反应4小时。
后处理:柱层析(SiO₂,DCM/MeOH)纯化,产率约60%。
注意:用途仅用于科研,以上来自齐岳生物小编wyh,我们可以提供产品的定制服务
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