巨噬细胞活化综合征 （MAS）是一种高炎症反应 综合征 ， 属于继发性 噬血细胞性淋巴组织细胞增生症 （HLH）， 是 风湿性疾病 ， 尤其是 成人斯蒂尔病（AOSD） 的严重并发症 ，显著 危害了患者的生存 。 尽管 目前 部分MAS患者经 包括 大剂量糖皮质激素 及 环孢素 在内的 一线方案 可 达到 缓解，但仍有部分难治性患者对常规治疗反应不佳 。 因此，深入解析MAS 发生 的分子机制，探索其关键信号通路，对 选择治疗方案 、改善患者 结局 具有重要价值。 团队前期的 研究表明，中性粒细胞介导的炎症风暴是AOSD的特征。因此，从中性粒细胞角度 切入 研究MAS的发生机制具有重要临床意义。
近日，上海交通大学医学院附属瑞金医院风湿免疫科胡琼依团队在Blood杂志上发表了题为RuxolitinibTargets JAK-STAT Signaling to Modulate Neutrophil Activation in Refractory Macrophage Activation Syndrome的研究论文，借助临床样本、体内外实验、高通量测序等手段，揭示JAK-STAT通路在AOSD-MAS中的致病作用，并证实以此为靶点使用选择性JAK1/2抑制剂芦可替尼治疗MAS的理论依据。
传统上认为MAS是单核吞噬细胞系统异常增殖和活化的结果，尽管中性粒细胞在AOSD中扮演重要的致病 角色 ，但其在MAS中的 身份 仍然未知 。为此，团队首先分析了AOSD-MAS患者的中性粒细胞和外周血单个核细胞（PBMC）的RNA-seq测序数据，发现中性粒细胞上调的差异基因显著富集于先天免疫相关的通路。同时，在CpG诱导的MAS小鼠模型中使用中性粒细胞特异性抗体清除中性粒细胞能显著降低炎症因子水平， 其效果 和清除单核细胞的效果相当。另外， 通过 RNA-seq测序、流式 细胞术 及 Olink 数据 分析发现 MAS患者中性粒细胞JAK-STAT通路激活，相关炎症因子 显著 升高。
进一步分析 发现 JAK1/JAK2与中性粒细胞功能相关基因呈强相关， JAK1/2抑制剂芦可替尼 已在HLH中证实其安全有效，然而在AOSD-MAS中 的使用经验 仅 在 个别 病例 报道 中 描述 。对此，团队对 本中心的 10例难治性AOSD-MAS患者使用芦可替尼进行治疗，发现8例实现完全缓解且 激素 剂量得以快速减量，1例达到部分缓解，另有1例在 激素 减量 过程中 出现复发。所有患者的临床症状、 Pouchot 评分和 HScore 显著下降在首月即得到改善。 O link 检测 到 中性粒细胞活化相关 细胞因子 在治疗后 亦明显下降。这些结果提示芦可替尼可抑制 MAS的过度 炎症反应 ，并可能有调节中性粒细胞的作用 。
为进一步探索芦可替尼对免疫细胞的影响，团队收集了患者芦可替尼治疗前后的中性粒细胞和PBMC进行RNA-seq测序， KEGG 分析发现芦可替尼 在转录组水平上 影响了中性粒细胞NETosis。 后续的原代细胞 体外实验证实治疗后中性粒细胞NETs形成 显著 减少， 并且 血清NETosis标志物显著下降。 利用NETosis缺陷 （ Padi4 -/- ） 小鼠进行体内实验 进一步 证实NETosis 能 介导MAS炎症风暴的发生。
继续使用GSEA 分析治疗前后的RNA-seq测序数据发现芦可替尼影响了中性粒细胞 的 IL - 6 - STAT3通路以及PBMC 的 IL-6 - STAT3和IL-2 - STAT5通路 ，这些患者的血清中也被证实存在能激活白细胞STAT3和STAT5磷酸化的成分 。 继而，在MAS模型中 选择性抑制STAT3或STAT5可减轻全身炎症反应 ，降低NETosis标志物 。
目前已知超过100个基因与HLH相关，其中11个致病基因的机制相对明确。然而，为何特定自身免疫性疾病患者会进展为MAS仍不清楚。 对这 10例使用芦可替尼治疗 的MAS患者进行WES测序发现 12个JAK-STAT通路相关基因 的VUS 变异 。功能学实验证明其中 PDGFRB 、 PDGFRA 、 SOCS4 、 PIAS4 、 IL7R 、 IL27RA 、 IL12RB1 、 IL11RA 和 IL10RA 中10个基因的变异能影响STAT3/STAT5的磷酸化。
综上所述 ， 这项研究揭示 中性粒细胞在MAS中的重要致病作用， 阐明 芦可替尼 能 通过广泛抑制JAK-STAT信号通路调控中性粒细胞活化 的机制 ， 为 临床使用 芦可替尼 治疗 难治性AOSD-MAS患者 提供 新的 理论依据 ，并有望推动AOSD-MAS的基因靶向治疗新策略 。
上海交通大学医学院附属瑞金医院风湿免疫科马宇宁医师、陈侠博士和王孟燕医师为论文的共同第一作者，胡琼依 副研究员 、贾锦超 主治医师 、孙悦 副研究员 和滕佳临 主任医师 为论文的共同通讯作者。
原文链接:https://ashpublications.org/blood/article/doi/10.1182/blood.2024024362/537326/Ruxolitinib-Targets-JAK-STAT-Signaling-to-Modulate
制版人：十一
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