文库筛选除了用于免疫检查点分子，也可以用于病毒受体的筛选。腺相关病毒（AAV）因其安全性、长期表达和组织靶向性等优势，已成为递送治疗基因的主流工具。但是，AAV病毒侵入细胞的关键受体尚不清楚。

2025年7月，Cell期刊发表题为An alternate receptor for adeno-associated viruses的研究论文。该研究通过全基因组sgRNA激活文库（靶向>20,000个人类基因的启动子）筛选技术，在AAV受体（AAVR）缺陷细胞中发现AAV功能性受体，羧肽酶D（CPD），并将其命名为AAVR2。研究团队不仅解析了AAVR2的分子作用机制，还开发出基于CPD的增强型基因治疗策略。

研究团队构建了AAVR基因敲除的eHAP细胞模型（eHAP AAVR KO），这些细胞可抵抗AAV8病毒转导。他们使用全基因组sgRNA文库（靶向>20,000个人类基因的启动子区）的CRISPR协同激活调控系统（SAM）；通过dCas9-VP64和MS2-p65-HSF1组分实现靶基因的转录激活；用AAV8-eGFP病毒感染筛选池，分选GFP阳性细胞群体；高通量测序分析富集的sgRNA及其靶基因。

经过多轮筛选和生物信息学分析（MAGeCK算法），羧肽酶D（CPD）基因的靶向sgRNA在GFP阳性细胞中显著富集：6条靶向CPD的sgRNA中有3条显著富集（FDR<0.05）；这些sgRNA均靠近CPD转录起始位点（TSS）；单sgRNA验证实验证实：激活CPD表达可使AAVR KO细胞的AAV8转导效率恢复50倍以上；研究者将这一新受体正式命名为AAVR2。

体外功能验证。在HuH7（人肝癌细胞）和Hepa1-6（小鼠肝癌细胞）中过表达AAVR2，可使AAV8转导效率提升。更重要的是，AAV11和AAV12完全依赖AAVR2，且独立于已知的AAVR通路。基因敲除反证：CRISPR敲除AAVR2可完全阻断AAV12转导，但不影响AAV8；siRNA敲低AAVR2同样选择性抑制AAV12转导。

体内功能验证。研究者构建了AAVR2基因敲除小鼠模型，发现Aavr2纯合敲除（-/-）胚胎致死，显示其在发育中的关键作用；杂合敲除（+/-）小鼠肝脏AAVR2蛋白表达降低50%；注射AAV11后，肝脏转导效率在杂合小鼠中降低，肌肉中转导效率降低。这一结果首次在动物模型中证实AAVR2是体内AAV转导的必需因子。

常规的CRISPR敲除文库筛选在寻找"代偿性受体"时存在局限——当AAVR缺失后，若没有其他受体能替代其功能，筛选将没有结果；CRISPR激活文库筛选通过"功能获得性"策略，强制过表达所有候选基因，能灵敏地捕捉到那些低表达但具备潜在代偿能力的受体分子。

参考资料，仅用于交流：