品名:Oregon Green 488 Carboxylic Acid Succinimidyl Ester 5-Isomer
用途:科研
一、基本描述
Oregon Green 488是一种基于荧光素骨架的绿色荧光染料,具有优良的光稳定性和水溶性,是常用的荧光标记探针之一。其琥珀酰亚胺酯(succinimidyl ester)活性形式特别适用于共价标记蛋白质、肽类、抗体和氨基修饰的表面分子。该化合物为5-异构体,与6-异构体相比,在空间构象上略有不同,但在多数应用中功能相似。
Oregon Green 488的激发波长约为496 nm,发射波长为524 nm,与FITC类似,但更具光稳定性,更低的pKa(~4.7),使其在弱酸性条件下也能保持高荧光强度。
二、化学性质
分子类型:荧光素类衍生物
活性基团:琥珀酰亚胺酯(NHS ester)
反应靶点:伯胺(–NH₂),如赖氨酸残基
溶解性:易溶于DMSO、DMF,部分溶于水
激发/发射波长:λ_ex ≈ 496 nm / λ_em ≈ 524 nm
稳定性:避光保存,-20°C下干燥稳定
NHS酯是一种高度活泼的酯类,可与含胺分子快速反应生成稳定的酰胺键。
三、标记方法
准备样品:目标分子应在无胺缓冲液中(如PBS或NaHCO₃,避免Tris),pH维持在8.3左右以促进胺基反应。
溶解染料:将Oregon Green 488 NHS酯溶于无水DMSO或DMF中(通常1–10 mM)。
加染料反应:按比例(常为1:5至1:20 mol/mol)滴加染料溶液至目标分子中,室温反应30–60分钟,避光。
去除游离染料:可采用透析、凝胶过滤柱(如Sephadex G-25)或离心滤管进行纯化。
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