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产品名称:DSPE-PEG-GKWHCTTKFPHHYCLY,磷脂乙二醇靶向肽的实验优化与注意事项
实验优化与注意事项
1. 关键参数优化
PEG分子量:
分子量过低(<2 kDa)无法有效屏蔽RES,过高(>10 kDa)可能影响靶向肽的灵活性。
推荐范围:PEG2000-PEG5000。
靶向肽密度:
密度过低(<5%)导致靶向效率不足,过高(>20%)可能引起空间位阻或聚集。
推荐密度:10%-15%(摩尔比)。
载体大小:
大小<200 nm易通过EPR效应在肿瘤组织蓄积,但<50 nm可能被肾脏快速清除。
推荐范围:80-150 nm。
2. 背景控制策略
非特异性结合抑制:
实验前用BSA或鱼皮凝胶封闭载体表面未反应基团。
使用含Tween-20的缓冲液(如PBST)洗脱未结合的靶向肽或药物。
对照实验设计:
阳性对照:使用已知高表达靶受体的细胞系(如U87 MG细胞表达αvβ3整合素)。
阴性对照:
省略靶向肽,验证载体是否依赖肽实现靶向。
使用无关肽(如SCRAMBLE序列)确认特异性
竞争实验:加入过量游离靶向肽,验证结合是否可被竞争性抑制。
3. 稳定性评估
化学稳定性:
通过HPLC或质谱检测靶向肽是否在储存或体内代谢过程中降解。
引入D-氨基酸或非天然氨基酸(如N-甲基化)提高稳定性。
物理稳定性:
监测载体在血清或生理盐水中的粒径变化(如DLS检测),避免聚集或沉淀。
优化冻干工艺(如添加蔗糖作为保护剂)提高长期储存稳定性。

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