写过国自然本子的都知道，研究方案部分有以下几个组成部分：研究方法、技术路线、实验手段和关键技术等。

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  • 那么研究方法、实验手段和关键技术，三者之间又有什么不同呢？

  • 这个「关键技术」指的是什么？有几种写法呢？

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一、研究方法、实验手段和关键技术的区别和关系

研究方法、实验手段、关键技术是申请书最重要的内容。这几部分即相互联系，又有区别。

1）研究方法

说明研究所采用的方法，把研究对象、研究材料、实验手段形成比较连贯的表述语句，已达到某种研究目的。如增殖、侵袭、转移分别对应什么方法，检测的目的是什么等；如数据挖掘的聚类分析、异常检测等方法，研究目的是什么。

举个例子：

细胞表型和 Hippo 信号通路的激活水平检测：使用 20μM 浓度 TMZ 培养上述各组细胞，检测细胞中的 XXX、YYY 的表达水平，检测 Hippo-YYY 通路相关蛋白（ZZZ、AAA）的表达水平和磷酸化水平，CCK8 法（日本同仁化学）检测细胞活性、BrdU 试剂（MCE 中国）检测细胞的增殖能力、Annexin V-FITC/PI 方法流式细胞术检测细胞凋亡情况、Transwell 检测细胞侵袭能力、划痕实验（wound healing）检测细胞的转移能力，评估细胞对 TMZ 的敏感性；RT-qPCR、WB 检测 XXX、YYY 表达水平，Hippo-YYY 通路相关蛋白（ZZZ、AAA）的磷酸化水平。

2）实验手段

与研究方法、技术路线相对应，包括计划做哪些实验，如何做，用何种实验方法，实验步骤如何？需要检测的技术指标及最后达到的目标等。

例如，承接上述研究方法，对应的实验手段如下：

① CCK-8 实验：细胞计数，以每孔 2000 个细胞的密度铺于 96 孔板中，每组三个复孔。细胞放入 37℃ 恒温培养箱中培养 48 小时，分别在不同的时间点加入 10μL Cell Counting Kit-8 试剂（日本同仁化学）后放入 37℃、5%CO2 恒温培养箱。在 30 min、60 min、90 min、120 min 的时间点上机检测；利用酶标仪测定在波长为 450nm 处的 OD 值，计算每组细胞的增殖能力。

② Transwell 实验：如前所述 300 多字，把实验步骤描述一遍。

③ Western blot 实验：如前所述 300 多字，把实验步骤描述一遍。

④ RT-qPCR 实验：如前所述 300 多字，把实验步骤描述一遍。

⑤ RIP 或者 RNA pulldown 技术、类器官实验手段等等。

3）关键技术

解决关键问题采用的技术。因此，关键词就是「关键科学问题」的解决。

二、「关键技术」的表达方式有几种写法？

青椒哥的建议至少有两种写法：

第一种叫做「在实验手段中标注 <关键技术> 」

例如某部分研究方法的实验手段如下格式写完了：

1）Transwell 实验：XXXXXXXXXXXXX。

2）Western blot 实验：XXXXXXXXXXXXX。

3）RT-qPCR 实验：XXXXXXXXXXXXX。

4）RIP（关键技术）：XXXXXXXXXXXXX。

5）RNA pulldown（关键技术）：XXXXXXXXXXXXX。

6）类器官实验（关键技术）：XXXXXXXXXXXXX。

第二种是重新开辟一段「关键实验技术」

格式大致如下：

1）研究方法

2）技术路线

3）实验手段

4）关键技术

在这一部分，你可以把主要实验手段按照以下部分进行概括：

① 细胞功能部分关键技术：CCK8 是基于 XXX 原理检测细胞增殖情况的；EDU 是基于 YYY 原理获得细胞增殖情况的；TUNEL 方法是基于 ZZZ 原理，实现细胞检测结果的；ELISA 负责检测蛋白的表达水平；WB 负责检测蛋白的表达水平和分子量大小；qPCR 获取的是蛋白的 mRNA 的表达水平信息 ……

② 分子实验部分：RIP、RNA pulldown 获取蛋白-RNA 分子互作信息；CO-IP、GST pulldown 获取的是蛋白和蛋白互作信息 …… 等等

③ 动物实验部分 …… 此处省略 N 个字儿。

因此，通过研究方法、技术路线图、实验手段以及关键技术的不同维度的呈现，使得你的研究方案更加立体，显得可行性极高。

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