品名:UDP-Glc-FITC(Glucose-UDP-Fluorescein Conjugate)
中文名称:葡糖基转移酶与梭菌酶荧光底物
用途:科研
一、基本描述
UDP-Glc-FITC 是尿苷二磷酸葡萄糖(UDP-Glc)的荧光衍生物,由 UDP、葡萄糖(Glc)与荧光素(FITC)通过共价键连接而成,专为检测葡糖基转移酶(如糖原合成酶、糖基转移酶)及梭菌酶(如梭菌属的糖基转移酶)活性设计。作为人工底物,其保留了 UDP-Glc 的天然结构特征,可被目标酶识别并催化转移葡萄糖基团,而 FITC 作为荧光报告基团,通过荧光信号变化反映酶的催化活性。该底物兼具特异性与可视化优势,是研究糖基化代谢、微生物酶功能及开发酶抑制剂的关键工具。
二、化学性质
分子结构中,UDP(尿苷 - 5'- 二磷酸)通过磷酸二酯键连接葡萄糖的 C1 位,形成 UDP-Glc 骨架;FITC 通过柔性连接臂(如氨基己基)偶联在葡萄糖的 C6 位(或 UDP 的尿苷部分),既不影响酶对底物的识别,又能高效传递荧光信号。分子式约为 C₃₄H₃₉N₃O₂₂P₂(分子量约 967 g/mol),具体因连接位点略有差异。
荧光特性:FITC 的激发波长为 494 nm,发射波长为 518 nm,荧光量子产率约 0.79,在溶液中呈强绿色荧光;
当葡萄糖基团被酶转移后,游离的 FITC - 葡萄糖(或残留的 UDP-FITC)因环境极性变化,荧光强度会发生特征性改变(如淬灭或增强),可通过荧光光谱或显微镜检测。
酶促反应特性:该底物与天然 UDP-Glc 的 Km 值接近(通常在 10-100 μM),可被葡糖基转移酶特异性识别,催化反应遵循米氏动力学;对梭菌酶的特异性尤高,如梭菌属的 UDP - 葡糖基转移酶可高效利用该底物,而其他菌属的糖基转移酶对其利用率较低(选择性达 10 倍以上)。
稳定性:固体状态下避光、-20℃储存可稳定 2 年;溶于缓冲液(如 50 mM Tris-HCl,pH 7.5)后需现配现用,4℃条件下可稳定 8 小时,高温(>37℃)或极端 pH(<5.0 或> 9.0)会导致 UDP 键水解,降低底物活性;对糖苷酶敏感,需避免与含糖苷酶的生物样本直接接触。
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