达托霉素C72H101N17O26是玫瑰孢链霉菌发酵产物脂肽类化合物a21978c的n-癸酰基衍生物,含有13个氨基酸,其中10个氨基酸形成环十脂肽,另外3个氨基酸与癸酰基相连形成侧链,是继万古霉素之后第二代糖肽类抗生素药。具有独特的化学结构和作用机制。通过钙离子依赖的方式靶向革兰氏阳性菌细胞膜,有体外快速杀除革兰氏阳性细菌的活性。
目前关于达托霉素含量与有关物质的检测方法的文献报道较少,所使用的方法主要有两种,高效液相色谱检测法(HPLC),及超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)。高效液相色谱是一种基于样品与固相和液相之间相互作用的分析技术。
样品通过溶剂携带在流动相中进入装填有特定固相的色谱柱内,基于各组分与固相之间的吸附、分配或离子交换作用,实现组分的分离具有操作简单、仪器成本相对较低以及设备普及性的优点,通过改变固定相的表面特性和优化流动相配比,可以在一定程度上提高达托霉素的分离效果,实现达托霉素的定量分析。
超高效液相色谱技术是一种对传统HPLC的改进技术,其核心优势在于采用粒径更小的填料、系统能承受更高的压力以及更窄的色谱柱。这使得UPLC能够在更短的时间内实现更高分离效率与更佳的峰形。对达托霉素的检测方法,越来越多的研究采用了UPLC-MS/MS联用技术。基于UPLC的三重四极杆质谱检测,实现达托霉素及其代谢物的高效分离和快速定量。
在HPLC和UPLC技术中,色谱条件的合理设定直接影响检测效果。主要参数包括色谱柱的选择、流动相的组成与梯度洗脱程序、柱温及流速控制、检测器设置等。在进行达托霉素检测方法开发时,还需对方法进行严格验证,如线性范围、LOD、LOQ、准确度及精密度进一步证明方法在达托霉素检测中的可靠性和适用性。
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