品名:TRITC-Phalloidin,罗丹明标记鬼笔环肽
用途:科研
一、基本描述
TRITC-Phalloidin是一种基于鬼笔环肽(Phalloidin)与罗丹明衍生荧光染料TRITC(Tetramethylrhodamine Isothiocyanate)偶联的荧光标记分子。鬼笔环肽是一种从毒伞菌提取的环状多肽,能够特异性结合并稳定肌动蛋白(F-actin),防止其解聚。通过TRITC标记,Phalloidin分子不仅保持了对F-actin的高亲和力,还赋予了橙红色荧光信号,可用于高分辨率细胞骨架成像。TRITC-Phalloidin广泛应用于细胞生物学、神经科学及病理学研究中,是观察肌动蛋白组织结构的重要工具。
二、化学性质
分子量:约1300–1400 Da,取决于Phalloidin与TRITC的偶联形式;
荧光性质:吸收波长约550 nm,发射波长约575 nm,橙红色荧光明显,适合共聚焦显微镜和荧光显微观察;
溶解性:可溶于有机溶剂(如DMSO)和缓冲液,水溶性有限;
稳定性:TRITC标记的Phalloidin在避光条件下较稳定,但长期光照会导致荧光淬灭;
结合特性:高亲和力结合F-actin,结合常数Kd约为0.5–1 μM,可选择性染色细胞内肌动蛋白纤维。
三、制备方法
TRITC-Phalloidin的制备通常包括以下步骤:
首先,通过化学合成或纯化获得高纯度Phalloidin;
通过异硫氰酸酯化学反应将TRITC分子偶联至Phalloidin肽链上的氨基,形成稳定的共价键;
使用高效液相色谱(HPLC)对偶联产物进行纯化,去除未反应的TRITC及副产物;
最终通过质谱(MS)确认分子量和偶联效率,同时用紫外-可见光光谱测定荧光特性。
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