Sci Adv丨陈卫团队建立植物糖基转移酶理性设计的新策略|化合物|植物|活性|糖基转移酶|糖苷|黄酮

黄酮糖苷类化合物作为一类重要的植物次生代谢产物，因其显著的生物活性而被用于多种疾病的预防和治疗。黄酮类化合物的糖基化由植物UDP-糖基转移酶（UDP-glycosyltransferases，UGTs）负责，这一催化过程对于合成结构多样、化学性质稳定和具有药用价值的黄酮糖苷类化合物具有重要意义。与传统的基于化学合成技术的糖基化反应相比，植物UGTs催化是一种绿色、经济的生物修饰方法。然而，大多数天然植物UGTs通常存在酶催化活性低、区域选择性差、底物谱或糖供体宽泛性有限等问题，极大地限制了其在农业、食品和生物医药等领域中的应用。

研究表明，在黄酮类化合物C-3'和C-7羟基的糖基化修饰可以提升其抗氧化、降血糖等生物活性。然而，可以催化黄酮类化合物在C-3'和C-7羟基糖基化修饰的植物UGTs鲜有报道。因此，深入挖掘植物中丰富的糖基转移酶资源，有助于阐明黄酮糖苷类化合物的生物合成途径，实现具有药用价值的黄酮糖苷化合物的定向合成。更重要的是，对具有应用潜力的糖基转移酶进行挖掘，以及开发相应的蛋白质工程策略对这些酶进行改造，可以有效弥补天然植物UGTs的催化缺陷，以满足具有药用价值的黄酮糖苷化合物的定向合成所需的高活性，区域选择性精准控制等功能要求。

近日，浙江大学陈卫教授团队在Science Advances在线发表题为

Comprehensive Engineering of Novel Glycosyltransferase for Efficient, Donor Promiscuous and Regioselective Glycosylation of Flavonoids

的研究论文，该论文综合运用合成生物学、食品科学、生物信息学、分子生物学、计算化学、药理学等多学科交叉技术，筛选鉴定出一种稀有的具有黄酮类化合物C-3'C-7羟基糖基化修饰功能的糖基转移酶UGT75AJ2，实现了具有降血糖活性的皮素O葡萄糖苷、皮素-7-O葡萄糖苷、芹菜素-7-O葡萄糖苷等黄酮糖苷类化合物的定向合成。该酶在具有药用价值的黄酮类化合物的糖基化修饰与生物合成等领域中具有巨大的应用潜力。

野生型植物UGTs的催化活性、区域选择性、底物谱宽泛性较差，限制了植物UGTs在工业生产中的应用。同时，植物UGTs的蛋白质工程改造研究目前主要多依赖于2-氯-4-硝基-苯酚颜色反应的筛选策略，而这种定向进化策略通长需要构建庞大的突变筛选文库，并且对于异源表达量较低的酶，以及酶的催化区域选择性改造无法适用。基于蛋白结构序列结合虚拟计算的理性设计策略被视为该领域的重要突破点，但目前仍没有一种全面、高效、普适的植物UGTs理性设计策略，使植物UGTs的定向改造面临瓶颈。

因此，作者团队开发了一套基于饱和突变筛选指导的针对植物UGTs定制的FRISM策略。从多维度蛋白结构预测，突变能计算分析指导，底物结合口袋重塑、关键氨基酸序列进化分析、分子动力学等手段对野生型UGT75AJ2进行理性设计，最终获得UGT75AJ2的四重突变体Mut4-1（S367A/V274A/F82V/I132T），其催化活性是野生型的128倍。随后，采用上述定制的FRISM策略对另外两种来源、糖基化修饰位点不同的植物糖基转移酶Vc3GT和 Ac3GT 成功进行酶活力提升改造，进一步验证了该策略的有效性和通用性。

图. 糖基转移酶UGT75AJ2的糖基供体宽泛性改造（源自论文）

此外，运用基于结构和序列信息指导下的氨基酸替换、饱和突变和组合突变技术手段，通过构建“小而精”的突变文库和高通量筛选，提升了UGT75AJ2的糖基供体宽泛性以及催化区域选择特异性，在丰富产物多样性的同时为高价值的黄酮 3'-O糖苷和7-O糖苷的生物合成提供了实用的合成生物学催化元件。

综上，该研究建立了植物糖基转移酶理性设计的新策略，为提升植物糖基转移酶的活性、糖基供体宽泛性与区域选择性提供了新范式，为蛋白质理性设计与定向改造在合成生物学与绿色生物制造领域的应用提供了新的视野和思路，为具有药用价值的黄酮糖苷类化合物的定向合成与大健康功能产品的创制提供了理论和实验基础。

浙江大学陈卫教授为论文通讯作者，浙江大学鲁洋博士与谢亮华副研究员为论文共同第一作者，浙江大学王勇研究员等为本研究做出了重要贡献。

https://www.science.org/doi/10.1126/sciadv.adu5064

陈卫，浙江大学教授、博士生导师，入选国家级人才项目。现任浙江大学食品生物科学技术研究所所长、浙江大学宁波国际科创中心食品院长、浙江省国际联合实验室主任、浙江大学-佐力药业智赋食药联合研发中心主任。承担国家自然科学基金、浙江省杰出青年基金、国家重点研发计划、国家科技支撑计划、浙江省重点研发计划等国家和省部级项目30余项。以第一完成人获中国专利奖、浙江省自然科学奖二等奖、中国产学研合作创新奖。担任SCI期刊J. Sci. Food Agric.执行主编、Food Qual. Saf. 区域主编、J. Funct. Food、 J. Zhejiang Univ.-SCI. B编委。以通讯/第一作者发表SCI论文160余篇，ESI高被引论文18篇，H指数56，授权发明专利26件。主要成果发表于Science Advances、Nature Communications、eLife、Autophagy 等国际高影响力期刊。陈卫教授团队长期招聘合成生物学、食品营养与安全、药理学、功能食品开发、人工智能与未来食品制造等研究方向的博士后、工程师、博士/硕士，应聘者请投递申请材料，并将应聘理由注明“姓名+应聘博士后/工程师”。通过初审者，我们将尽快安排面试。

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