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产品名称:Streptavidin, Alexa Fluor 647 Conjugate,链霉亲和素-Alexa Fluor 647偶联物
1. 荧光特性与优势
光谱性能:近红外发射(约665 nm)有效避开生物样本内源性荧光(如细胞自荧光),降低背景噪声,提升信噪比;光稳定性强,耐受长时间激光照射(如共聚焦显微镜动态观测),量子产率高,荧光亮度强。
多色兼容性:可与Alexa Fluor系列其他染料(如AF488、AF555)或Cy系列染料联用,实现多色荧光实验,避免光谱重叠。
穿透能力:近红外光子在生物组织中散射和吸收较少,穿透深度可达8-10 mm,适用于深层组织切片、活体成像及小动物光学成像。
2. 生物相容性与安全性
低非特异性结合:链霉亲和素无糖基化,等电点近中性(pI 5-6),减少非特异性吸附;Alexa Fluor 647水溶性好,生物相容性佳,适合体内实验(仅限科研,不可用于人体治疗或诊断)。
毒性管理:操作需在通风橱中进行,佩戴防护装备;废弃物按危险废物处理。长期体内应用需评估代谢产物毒性及免疫原性(如抗链霉亲和素抗体反应)。
稳定性管理:需严格避光、低温保存;溶液状态易受pH、温度及去污剂影响,建议使用弱碱性缓冲液(pH 7.0-8.5)进行偶联反应,避免强酸/碱或巯基试剂干扰。
3. 合成与操作挑战
合成策略:通过NHS酯活化或点击化学(如SPAAC)将Alexa Fluor 647与链霉亲和素共价连接;多步合成需高纯度中间体,优化反应条件(如温度、pH、催化剂用量)以提高产率与纯度(≥95%)。
纯化与储存:采用透析、凝胶过滤或HPLC纯化,去除未反应染料;冻干粉需-20℃以下干燥避光保存,溶液状态避免反复冻融。
操作规范:反应需在惰性气体(如氮气)保护下进行,防止氧化或水解;工作液现配现用,控制反应时间(1-4小时,室温或4℃孵育)。
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