HJ 535-2009的核心技术原理基于纳氏试剂与氨氮的特异性显色反应，结合分光光度法实现定量测定，其逻辑可概括为“显色-比色-定量”三个核心步骤：
第一步是显色反应。在碱性条件下，水样中的氨氮（主要以NH₄⁺形式存在）与纳氏试剂中的碘化汞离子反应，生成黄棕色的碘化氧汞铵络合物。该反应具有极强的特异性，在规范预处理的前提下，水体中常见的氯离子、硫酸根离子、钙镁离子等均不会干扰反应进行。反应方程式可简化为：2K₂[HgI₄] + 3KOH + NH₃ → NH₂Hg₂OI↓（黄棕色） + 7KI + 2H₂O。
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第二步是比色测量。黄棕色络合物的浓度与氨氮含量在一定范围内严格遵循朗伯-比尔定律，即络合物浓度越高，吸光度越大。通过分光光度计在420nm波长处测量显色后溶液的吸光度，即可建立吸光度与氨氮浓度的对应关系。
第三步是定量计算。以一系列已知浓度的氨氮标准溶液绘制标准曲线，将样品的吸光度代入标准曲线回归方程，即可计算出样品中氨氮的准确含量。该原理的优势在于反应速度快（显色稳定时间为10分钟~30分钟）、灵敏度高，可满足低浓度氨氮样品的精准测定需求。
实验准备：仪器、试剂与样品的“三重保障”
HJ 535-2009对实验准备的各个环节提出了严格要求，仪器的精准度、试剂的纯度及样品的规范性直接决定检测结果的可靠性，三者共同构成实验成功的“三重保障”。
（一）仪器设备的选型与校准
标准明确了核心仪器的技术参数，确保检测精度：
- 分光光度计：需具备波长范围300nm~800nm，波长准确度±2nm，吸光度测量范围0~2A，在420nm波长处的透光率误差不超过1%，配备10mm、20mm比色皿。使用前需用标准滤光片校准波长，确保仪器性能稳定。
- 比色管：容积50mL，具塞，刻度准确，需经过校准，避免因体积误差导致结果偏差。
- 分析天平：精度不低于0.1mg，用于基准试剂的称量，确保标准溶液浓度准确。
- 预处理设备：包括离心机（转速≥4000r/min）、蒸馏装置、离子交换柱等，根据水样干扰类型选用，用于去除浊度、颜色及特定干扰离子。
（二）试剂与材料的质量管控
试剂的纯度与配制规范性是显色反应成功的关键，标准对此作出严格规定：
- 纳氏试剂：推荐采用“碘化汞-碘化钾-氢氧化钠”配方配制，碘化汞、碘化钾需选用分析纯及以上级别，氢氧化钠选用优级纯。配制过程中需确保碘化汞完全溶解，避免沉淀影响显色效果，配制后的试剂需避光冷藏保存，有效期不超过1个月。
- 氨氮标准储备液：浓度为1000mg/L，可选用市售有证标准物质，或通过基准氯化铵配制，配制后需在4℃冷藏条件下保存，有效期为1个月。
- 酒石酸钾钠溶液：浓度为500g/L，分析纯酒石酸钾钠配制，用于掩蔽水样中的钙、镁离子干扰，配制后需加热煮沸去除其中的氨，冷却后使用。
- 实验用水：需符合GB/T 6682规定的无氨水，避免水中氨氮引入背景干扰，可通过蒸馏法或离子交换法制备。
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