寡核苷酸是由2-30个核苷酸残基通过磷酸二酯键连接而成的短链核酸片段，广泛用于生物治疗（包括基因治疗、RNA干扰和反义寡核苷酸疗法）而备受关注。这些化合物的治疗效果高度依赖其纯度和结构完整性，因此建立稳健的分析方法对质量控制至关重要。
HPLC法是监控寡核苷酸合成的关键技术，能为其纯度和结构完整性提供有价值的参考。然而，由于寡核苷酸结构复杂且存在杂质，传统的HPLC方法在分离寡核苷酸时面临挑战。提高 pH 和温度的条件会进一步增加分离难度，因为传统全孔颗粒（FPP）色谱柱的硅胶填料通常不适合此类条件。
BIOshell™ A120 Oligo C18色谱柱采用熔融核Fused-Core®颗粒技术，具有快速、高效的特点。表面改性的有机硅烷，具有耐碱性，在使用高pH值分离寡核苷酸时具有优异的稳定性，这项创新技术有助于开发稳健的方法，改善碱性化合物的分离效果。碱性化合物在低 pH 条件下通常峰形不佳、保留不足等问题。BIOshell™色谱柱表面惰性的硬件，很好的解决了样品吸附问题，可用于生物惰性系统。
BIOshell™ Å120 Oligo C18色谱柱特点
•120 Å孔径：能分离长达60个碱基的寡核苷酸
•高pH值和高温条件下出色的稳定性：专为分离寡核苷酸而设计
•兼容性：与UHPLC和质谱兼容的键合相
•硬件经表面惰性处理：最大程度降低样品吸附
- 键合相：表面修饰的二甲基十八烷基硅烷
- 颗粒大小: 2.7 μm
- 孔径: 120Å
- USP分类: L1
- 碳载量: 5.6%
- 表面积: 75m2/g
- 是否封端: 是
- 柱温（低pH）: 2/90 °C，柱温（高pH）: 9/85 °C
优异的批间重现性
使用4个不同批次的色谱柱，对含10-60个不同长度碱基的单链DNA样品进行分析。
出峰顺序：1. 10 mer， 2. 15 mer ，3. 20 mer ，4. 25 mer ，5. 30 mer ，6. 40 mer ，7. 50 mer ，8. 60 mer
色谱条件：
色谱柱： BIOshell™ A120 Oligo C18, 2.7μm, 5 cm x 2.1 mm I.D.( 70003-U)
流动相A：10mM TEAA, pH 8.5
流动相B：乙腈
梯度时间：
流速：0.5 mL/min
背压：125 bar
柱温：60 °C
进样体积：1.0 μL
样品溶剂：10mM Tris HCl/1mM EDTA
检测波长：UV/PDA, 254 nm
流通池：1 μL
采集频率100 Hz
响应时间0.025 s
对比实验
与FPP柱相比，BIOshell™ A120 Oligo C18柱在分离寡核苷酸方面表现出更优异的性能。如下图，在高pH条件下，BIOshell™ A120 Oligo C18和其他品牌的寡核苷酸色谱柱分离不同长度的寡核苷酸混合物。在对比色谱柱上，由于FPP色谱柱扩散路径增加，FPP峰形较差，20个碱基及以上的低聚物出现拖尾。由于BIOshell™ Fused-Core®颗粒色谱柱的快速和高柱效，相同样品在BIOshell™色谱柱上无拖尾。
出峰顺序：1.10 mer ，2. 15 mer， 3, 20 mer， 4. 25 mer ，5. 30 mer， 6. 40 mer ，7. 50 mer， 8. 60 mer
色谱条件：
色谱柱： BIOshell™ A120 Oligo C18, 2.7μm, 5 cm x 2.1 mm I.D.( 70003-U)
对比柱：Oligo 130A C18,1.7um,2.1*50mm
流动相A：100mM TEAA, pH 8.5
流动相B：乙腈
梯度时间：
流速：0.5 mL/min
背压：BIOshell™140 bar, 对比柱255bar
柱温：60 °C
进样体积：1.0 μL
样品溶剂：10mM Tris HCl/1mM EDTA
检测波长：UV/PDA, 254 nm
流通池：1 μL
采集频率100 Hz
响应时间0.025 s
分离寡核苷酸混合物
在高pH条件下使用BIOshell™ A120 Oligo C18色谱柱，可以在5分钟内分离出含有6种不同寡核苷酸的样品。
出峰顺序：1.20 mer， 2. 15 mer ，3.12 mer ，4. 25 mer， 5. 33 mer， 6. 12 mer
色谱条件：
色谱柱：BIOshell™ A120 Oligo C18, 2.7μm, 5 cm x 2.1 mm I.D.（70003-U）
流动相A：100mM TEAA, pH 8.5
流动相B：乙腈
梯度时间：
流速：0.4 mL/min
背压：142 bar
柱温：50 °C
进样体积：1 μL of Oligonucleotide Performance Standard Mix, 12-33 NT
样品溶剂：10mM Tris HCl/1mM EDTA
检测波长：PDA, 254 nm
流通池：1 μL
采集频率：100 Hz
相应时间：0.05 sec.
分离不同大小寡核苷酸
以下是分离寡核苷酸标准混合物(含有10-60个ssDNA)的应用。使用了乙酸三乙胺(TEAA)和乙腈梯度洗脱。在3.5分钟内，使用BIOshell™ A120 Oligo C18, 2.7μm, 5 cm x 2.1 mm I.D.( 70003-U)，可分离长达60个碱基的寡核苷酸，并获得优异的峰型和分离。
出峰顺序：1.10 mer ，2. 15 mer， 3, 20 mer， 4. 25 mer ，5. 30 mer ，6 .40 mer ，7 .50 mer ，8. 60 mer
色谱条件：
色谱柱：BIOshell™ A120 Oligo C18, 2.7μm, 5 cm x 2.1 mm I.D.( 70003-U)
流动相A：10mM TEAA, pH 8.5
流动相B：乙腈
梯度时间：
流速：0.5 mL/min
背压：137 bar
柱温：60 °C
进样体积：2.0 μL, (10 μg )
样品溶剂：10mM Tris HCl/1mM EDTA pH=8.0
检测波长：PDA, 254 nm
流通池：1 μL
采集频率：100 Hz
相应时间：0.025 sec.
默克可提供定制cGMP寡核苷酸
如果您计划进行分子诊断(MDx)商业化，实验室研发试验(LDT)，或进行临床前研究，最终的成品试剂盒、检测试剂或药品必须具有非凡的质量水平，符合严苛的监管或研究标准。对于寡核苷酸原料，定制cGMP寡核苷酸是唯一值得您考虑的选择。
根据cGMP生产寡核苷酸可最大限度降低污染、混淆、偏差、失效等错误的概率来规避风险，从而确保寡核苷酸产品满足MDx、LDT和临床前研究的严苛要求。
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• 制造符合美国GMP(21 CFR 820)
• 在分类洁净室内填充ISO 14644-1:2015 Class 8
• 生产厂房符合ISO 13485质量管理体系认证
2. 材料可追溯性—凭借广泛的材料可追溯性，可随时获得证明已遵循经过验证的制造流程的证据。
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默克实力
作为商业化寡核苷酸产品的一部分，定制cGMP寡核苷酸具有一致性和最高质量。无论您是想将qPCR，等温扩增，NGS或其他技术的检测方法商业化还是开发，我们的产品都能在广度和深度之间取得适当的平衡。
最终产品质检
除了在制造过程中内置了许多质量检查外，最终产品还会经过以下检验。
标准质量控制：
• 通过质谱法进行序列验证
• 通过紫外光谱进行定量分析
• 进行外观检查
质量检测：
• 通过HPLC进行纯度验证
• DNase/RNase测量
• 内毒素检测
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