Hela细胞培养攻略
HeLa 是一种上皮细胞，是从一名患有腺癌的 31 岁黑人女性的子宫颈中分离出来的。该细胞可用于传染病研究、性传播疾病研究和生物生产。该细胞系可用于 ISO 17025 认证实验室的检测和校准，以挑战检测性能、验证或比较检测方法，并在检测验证或实施过程中建立灵敏度、线性和特异性。
一、细胞介绍
1.1.细胞参数
【细胞名称】 Hela(人子宫颈癌细胞)
【细胞别称】 HeLa; Hela; He La; He-La; Henrietta Lacks cells; Helacyton gartleri
【种属来源】 人
【培养条件】 5% CO2；37℃
【冻存条件】 液氮储存
【倍增时间】 约32-48小时
【推荐传代比例】 1:2-1:6
【换液频率】 2-3次/周
【年龄性别】 31岁，女
【组织来源】 宫颈腺癌
【生长特性】 贴壁生长
【细胞形态】 上皮细胞样
【培养基】 MEM+10% FBS+1%PS
【细胞代数】 10代以内
【生物安全等级】 BSL-2
【基因表达情况】 Lysophosphatidylcholine (lyso-PC) induces AP-1 activity and c-jun N-terminal
kinase activity (JNK1) by a protein kinase C-independent pathway.
The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining.
【保藏机构】 ATCC; CCL-2 ATCC; CRM-CCL-2 ATCC; CRL-7923 BCRC; 60005 BCRJ; 0100 DSMZ; ACC-57 ECACC; 08011102 ECACC; 93021013；中国医学科学院基础医学研所细胞资源中心
所用产品：
1.2.质控信息
【无菌检测】 阴性
【支原体检测】 阴性
【物种/STR鉴定】 正确
二、培养操作
/ 金源康生物 /
2.1、复苏培养操作
（1）恒温水浴锅预热至37℃备用，或者细胞复苏仪开机预热准备；
（2）准备15ml离心管，并向其中加入8ml完全培养基（JYK-CT-0002M）待用；
（3）将细胞冻存管从-80℃冰箱或液氮中取出，放入PE手套中，迅速投入恒温水浴锅中或者直接置于细胞复苏仪中；
（4）在恒温水浴锅中，用力摇晃冻存管，使其在1分钟内融化；在细胞复苏仪中，按照程序操作即可；
（5）用纸巾或无尘布擦拭水渍，75%酒精消毒后转移至生物安全柜或者超净工作台。用移液枪吸取细胞悬液，缓慢滴加到步骤2中准备好的离心管；
（6）1000rpm离心5min；
（7）离心后弃上清，用新鲜完全培养基（JYK-CT-0002M）重悬细胞，混匀取样20ul计数后，根据实验需要接种至新的无菌培养器皿中；
（8）镜检细胞状态，拍摄100x、200x照片各3张；
（9）置于37℃，5%CO2培养箱中进行培养，24h后镜检观察细胞复苏情况（贴壁情况）。
所用产品：
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2.2、传代培养操作
（1）取培养中的细胞，镜下观察细胞汇合度和生长状态，若细胞汇合至90%以上，即可传代，拍摄100x、200x照片各3张；
（2）去除培养上清，加入PBS（JYK-SH-001）清洗细胞（T25瓶，加入5ml；T75瓶，加入10ml）；
（3）加入0.25%胰酶（JYK-SX-002）（T25瓶，加入2ml；T75瓶，加入4ml），放入培养箱中或者室温下消化解离3min左右，可用显微镜观察状态，若观察到细胞离散成单个圆形、细胞间出现间隙、呈沙状移动，并悬浮在培养基中即可；
（4）加入完全培养基（JYK-CT-0002M）（T25瓶，加入5ml；T75瓶，加入10ml）终止消化，反复吹打瓶底和细胞，使其充分悬浮并吸取到离心管中，用PBS（JYK-SH-001）（T25瓶，加入5ml；T75瓶，加入10ml）再洗培养瓶一次，将两次液体收集到一支离心管中；
（5）1000rpm离心10min；
（6）离心后弃上清，轻轻敲击细胞沉淀，使其散开，加入1ml完全培养基（JYK-CT-0002M）稀释并充分混匀；
（7）计数，吸取细胞液20ul，加入20ul台盼蓝染液，混合均匀后吸取20ul混合液加入到细胞计数板计数，根据接种密度计算所需细胞液体积；
（8）根据实验需要，吸取一定量的细胞液加入到培养瓶，加入完全培养基（JYK-CT-0002M）（T25瓶，加入10ml；T75瓶，加入20ml），轻轻前后摇匀，在瓶身写好细胞名、培养代数、日期、姓名；
（9）镜下观察看是否已经摇匀，无误后放入培养箱37℃、5% CO2、90%湿度条件下培养。
所用产品：
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2.3、冻存操作
（1）取培养中的细胞，镜下观察细胞汇合度和生长状态，若细胞汇合至90%以上，即可传代，拍摄100x、200x照片各3张；
（2）去除培养上清，加入PBS（JYK-SH-001）清洗细胞（T25瓶，加入5ml；T75瓶，加入10ml）；
（3）加入0.25%胰酶（JYK-SX-002）（T25瓶，加入2ml；T75瓶，加入4ml），放入培养箱中或者室温下消化解离3min左右，可用显微镜观察状态，若观察到细胞离散成单个圆形、细胞间出现间隙、呈沙状移动，并悬浮在培养基中即可；
（4）加入完全培养基（JYK-CT-0002M）（T25瓶，加入5ml；T75瓶，加入10ml）终止消化，反复吹打瓶底和细胞，使其充分悬浮并吸取到离心管中，用PBS（JYK-SH-001）（T25瓶，加入5ml；T75瓶，加入10ml）再洗培养瓶一次，将两次液体收集到一支离心管中；
（5）1000rpm离心10min；
（6）将离心后的细胞液倒掉上清，轻轻敲击细胞沉淀，使其散开，加1ml预冷冻存液（JYK-SD-003）混匀；
（7）计数，吸取细胞液20ul，加入20ul台盼蓝染液，混合均匀后吸取20ul混合液加入到细胞计数板计数；
（8）根据计数结果，添加冻存液（JYK-SD-003），调整细胞最终密度为5×106/ml；
（9）将细胞分装入冻存管中，每管1ml；
（10）冻存管标记细胞名称，细胞代数、细胞密度、冻存时间，操作者。
（11）按照冻存程序进行细胞冻存。参考冻存程序见下表：
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三、注意事项
1增殖异常迅速，感染性极强，易污染其他细胞；
2细胞贴壁能力较弱，换液或传代时操作应轻柔；
3消化时不要通过敲击或摇晃培养器皿来搅动细胞，以免形成细胞团；
4培养条件过酸或过碱，则可呈现为梭形而似成纤维细胞样。
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