不用体外培养！体内直接造 CAR-T 细胞，这项技术要火了|免疫|新型癌症疫苗|泌体|癌细胞|蛋白|雷帕

摘要：CAR-T 疗法作为癌症免疫治疗的明星技术，在血液肿瘤治疗中创下了惊人的完全缓解率，但面对实体瘤、毒性反应等难题却束手无策。而生物纳米颗粒（BNPs）的出现，正成为破解这些瓶颈的关键。本文从 CAR-T 疗法的现状与困境出发，详解外泌体、仿生纳米颗粒等生物纳米载体的独特优势，拆解它们在体内外改造 CAR-T 细胞、精准递送基因、降低治疗毒性的核心机制，带大家看清这项跨界技术如何让癌症治疗更安全、更高效。

一、CAR-T 疗法：风光背后的 “甜蜜烦恼”

2017 年，首款 CAR-T 疗法获批上市，标志着癌症治疗进入“活药”时代。这种通过基因工程改造患者自身 T 细胞，让其精准识别并杀死癌细胞的技术，在复发难治性淋巴瘤、白血病等血液肿瘤中，实现了 40%-81% 的完全缓解率，给无数患者带来希望。

但光鲜数据背后，CAR-T 疗法的短板同样突出。最棘手的是细胞因子释放综合征（CRS）和免疫效应细胞相关神经毒性综合征（ICANS），前者在 77%-89% 的患者中出现，严重时可引发多器官衰竭；后者影响 30%-60% 的患者，可能导致意识模糊甚至死亡。

此外，CAR-T 疗法对实体瘤疗效平平，这是因为肿瘤微环境的免疫抑制作用、癌细胞抗原异质性等因素，让改造后的 T 细胞难以渗透并持续发挥作用。同时，传统 CAR-T 需要体外分离、培养、改造细胞，流程复杂、成本高昂，还存在治疗后复发率高的问题。

二、生物纳米颗粒：CAR-T 的 “神助攻” 登场

为解决 CAR-T 疗法的困境，科学家们将目光投向了生物纳米颗粒。这类由生物材料制成的微小载体，粒径从几十到上千纳米不等，兼具生物相容性高、免疫原性低、能精准递送 cargo 等优势，成为改造 CAR-T 疗法的理想工具。

目前主流的生物纳米颗粒主要分为三类：一是外泌体，由细胞自然分泌的 30-150nm 囊泡，自带细胞通讯 “密码”，能自然穿越生物屏障；二是仿生纳米颗粒，用红细胞、T 细胞等细胞膜包裹合成内核，既有天然细胞的靶向性，又有合成材料的稳定装载能力；三是病毒样颗粒（VLPs），由病毒结构蛋白组装而成，无病毒基因组，安全性更高，还能高效递送基因。

这些纳米载体就像为 CAR-T 细胞量身定制的 “快递车”，既能装载 CAR 基因、mRNA 等 “货物”，精准送到目标 T 细胞中，又能避免传统病毒载体的免疫排斥问题，还能通过设计实现 “按需释放”，从根源上降低治疗毒性。

三、体外改造：让 CAR-T 细胞更 “能打” 还安全

传统体外 CAR-T 细胞制备，存在基因递送效率低、细胞易耗竭等问题。而生物纳米颗粒的加入，让这一过程实现了 “提质增效”。

科学家通过外泌体或仿生纳米颗粒，将 CAR 基因精准递送到体外分离的 T 细胞中，不仅转染效率更高，还能避免病毒载体带来的插入突变风险。更重要的是，这些纳米载体可同时装载细胞因子、小分子药物等，帮助 T 细胞维持 “记忆干细胞” 表型，增强其在体内的增殖能力和持久性。

研究显示，用生物纳米颗粒改造的 CAR-T 细胞，在体外实验中对肿瘤细胞的杀伤效率提升了 30% 以上，且耗竭标志物 PD-1 的表达显著降低。这种 “强化版” CAR-T 细胞，为攻克实体瘤提供了更强的 “弹药”。

四、体内改造：无需体外培养，打针就能造 CAR-T

如果说体外改造是 “升级”，那生物纳米颗粒实现的体内 CAR-T 细胞生成，就是 CAR-T 疗法的 “革命”。这种方式无需分离患者 T 细胞，直接将装载 CAR 基因的纳米载体注入体内，让 T 细胞在体内完成改造，大幅简化治疗流程。

比如用腺相关病毒（AAV）结合生物纳米颗粒，可将 CAR 基因精准递送到体内 T 细胞，在小鼠模型中成功实现肿瘤 regression，且避免了体外培养的复杂步骤。还有研究用表面修饰了抗 CD3 抗体的脂质纳米颗粒，能特异性识别 T 细胞，将 CAR-mRNA 递送入内，让 T 细胞在体内快速表达 CAR 蛋白，发挥杀伤作用。

更令人惊喜的是，体内生成的 CAR-T 细胞来自患者自身未耗竭的免疫细胞，抗肿瘤活性更强。图 3 清晰展示了体外与体内 CAR-T 细胞制备的流程差异，体内疗法省去了细胞分离、培养、回输等多个环节，让治疗更便捷。

五、精准控效：告别 “杀敌一千，自损八百”

CAR-T 疗法的毒性主要源于 T 细胞的过度激活，而生物纳米颗粒能通过 “精准调控”，让治疗更安全。一种名为 “NanoSwitch” 的技术，在 CAR 结构中加入了雷帕霉素诱导的二聚化系统，平时 CAR-T 细胞处于休眠状态。

当与装载雷帕霉素的明胶酶敏感纳米颗粒联合使用时，只有到达肿瘤部位（高表达明胶酶），纳米颗粒才会释放雷帕霉素，激活 CAR-T 细胞。这种 “肿瘤局部激活” 模式，避免了 CAR-T 细胞在正常组织中过度反应，大幅降低了脱靶毒性（图 7）。

此外，pH 敏感型纳米颗粒可装载 IL-6 拮抗剂等药物，在肿瘤微环境的酸性条件下释放，特异性抑制细胞因子风暴，而不影响全身免疫功能（图 8）。实验证明，这类纳米载体能使 CRS 发生率降低 50% 以上，且不削弱 CAR-T 细胞的抗肿瘤效果。

六、CAR-T 的 4 代进化，纳米技术加速迭代

从 1989 年首款 CAR 结构被提出，到如今的 “智能 CAR”，这项技术已历经 4 代进化（图 1）。第一代 CAR 仅含 CD3ζ 信号域，增殖能力弱；第二代加入 CD28 或 4-1BB 共刺激域，大幅提升细胞持久性；第三代叠加两个共刺激域，却因过度激活导致细胞耗竭；第四代则加入细胞因子诱导元件或逻辑门系统，安全性和针对性更强。

而生物纳米颗粒的融入，正加速 CAR-T 的迭代速度。通过纳米载体递送 circRNA（环形 RNA），可让 CAR 蛋白持续表达数周；用外泌体递送 CRISPR/Cas9 系统，能精准编辑 T 细胞基因组，敲除 PD-1 等抑制基因，同时插入 CAR 基因，打造 “超级 CAR-T 细胞”。