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产品名称:DSPE-PEG-Biotin的合成与储存要点
一、合成方法与核心路径
分步偶联策略
中间体制备:DSPE与羧基化PEG(COOH-PEG)在偶联剂(如EDC/NHS)作用下形成酰胺键,生成DSPE-PEG-COOH;经NHS活化后转化为DSPE-PEG-NHS活性酯。
生物素偶联:生物素氨基与DSPE-PEG-NHS发生酰胺化反应,形成稳定DSPE-PEG-Biotin。反应需在惰性气体(如氮气)保护、pH 7.2-7.5条件下进行,避免NHS酯水解或副反应。
纯化与表征:产物经透析去除未反应试剂,冷冻干燥得固体粉末;通过HPLC、NMR及FTIR验证结构与纯度(≥95%),确保生物素与PEG链完整连接。
反应条件优化
摩尔比控制:DSPE-PEG-NH₂/COOH与NHS-Biotin按1:1.2-1.5比例混合,确保生物素充分偶联。
温度与时间:室温或4℃反应数小时至过夜,避免高温(>37℃)导致PEG链断裂;低温延长反应时间需平衡效率与稳定性。
溶剂选择:水或PBS缓冲液为主,可添加DMF/DMSO助溶疏水DSPE,但需避免蛋白偶联时溶剂影响活性。
二、储存条件与稳定性管理
长期保存
温度与环境:-20℃避光、干燥保存,避免反复冻融;分装小份使用,有效期通常12个月。惰性气体(如氮气)填充包装可减少氧化风险。
溶液状态:溶解后4℃避光保存≤1周,使用非胺类缓冲液(如Tris、HEPES),避免含氨基/巯基竞争剂(如甘氨酸、DTT)。
短期使用与防护
避光与密封:生物素基团对光照和氧化敏感,需密封避光保存,避免长时间暴露空气中。
温度控制:生物素-亲和素结合在4℃至室温下进行,高温(>37℃)减弱结合力;操作需佩戴防护装备,废弃物按实验室规范处理。
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