菌落蔓延确实是微生物实验中的“噩梦”。别担心，针对这个老大难问题，有效的预防策略和发生后的补救方法都很明确。
为什么会发生菌落蔓延？
通常，蔓延是以下一个或多个因素共同作用的结果：
预防指南
预防的核心是“控制水分、阻止扩散、优化操作”。
1. 核心操作流程优化
及时倾注与混匀：样品稀释后，在30分钟内完成倾注并立即摇匀，防止菌体聚集。
确保平板干燥：倾注前，将空平皿在洁净工作台内倒置晾干；倾注凝固后，可置于37℃烘箱短时烘干，或倒置于超净工作台内吹干表面冷凝水。
坚持倒置培养：除非标准强制要求正置（如霉菌检验），否则一律采用倒置培养，这是防止冷凝水滴落导致蔓延的最基本措施。
2. 抑制蔓延的物理与化学方法
当怀疑样品中含有易蔓延菌时，可主动采用以下方法：
琼脂覆盖法（推荐）：在已凝固的培养基表面，再覆盖一薄层（约4mL）无菌琼脂。这层琼脂能限制好氧菌的表面迁移，并固定已生长的菌落。研究证实此法能显著减少蔓延。
使用TTC：在培养基中加入适量TTC（氯化三苯基四氮唑）。细菌生长时会将其还原为红色，不仅便于观察，TTC本身也有一定抑制蔓延的作用。
3. 针对霉菌等特殊微生物的防控
霉菌检测常需正置培养，污染和孢子扩散风险更高。
加强培养箱消毒：定期用75%酒精或新洁尔灭擦拭，并开启紫外线消毒。
验证污染源：若频繁污染，可做空白对照试验（如用自封袋密封部分平板）来排查是培养箱还是操作环境的污染。
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发生蔓延后的补救计数方法
如果预防失败，仍可尝试对平板进行挽救性计数：
选择可计数区域：仔细观察，尝试计数蔓延区域边缘的分散、独立菌落。
覆盖琼脂固定法：若菌落仍在表层扩散，可将已蔓延的平板在生物安全柜中打开，小心倒入一层冷却至45-50℃的无菌琼脂，覆盖原有菌落。凝固后，下层被固定的菌落将停止蔓延，便于计数。
判断与报告：
若蔓延面积超过平板面积的1/2，或经补救仍无法准确计数，应舍弃该平板数据。
在实验记录和报告中，需明确注明“存在蔓延生长”，并说明计数方法或舍弃原因，以保证数据的真实性和可追溯性。
重要提醒
生物安全：所有发生蔓延、疑似污染或已结束培养的平板，都必须经过高压蒸汽灭菌后，再交由专业机构处理，不可随意丢弃。
结果有效性：若所有平行平板均因蔓延而无法计数，本次实验数据无效，必须从样品稀释重新开始实验。
总的来说，解决菌落蔓延的关键在于严格规范操作以预防，并掌握覆盖琼脂等有效的抑制与补救技术。根据你的具体实验（如常规菌落总数计数、霉菌酵母计数或质粒转化涂板），侧重点会有所不同。
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