条带很漂亮呀，你怎么还愁眉苦脸的？
师姐你不知道，每当电泳一次成功的时候，我就知道苦日子要来了，下次实验别说漂亮的条带，可能连内参都跑不出来。
那很坏了！
更离谱的是，试剂快用完了，新采购的批次就不一定能做出这个效果了。你也要做重复吧，怎么一点不着急？
哈哈哈哈，因为我的实验是预制的，不仅开盒即用，重复性还很好!每次省下几小时操作不香吗？
说实话，做科研就该把时间花在刀刃上！拒绝在繁琐耗时，重复性低的手工配胶上浪费精力！正好赛默飞推出 NovaPAGE Bis-Tris 预制胶试用活动，轻松复刻漂亮条带，节省更多时间，识别下方二维码，限量 66 份试用装马上抢 >>
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为什么要选 NovaPAGE Bis-Tris 预制胶？
重复性好，条带漂亮：近中性 pH 体系确保条带清晰锐利，实验结果稳定可靠。
浓度选择范围广，匹配不同实验需求：4～12%、8～16%、4～20%、10%、12%
适配伯乐、六一、天能等常见电泳槽，零门槛融入现有工作流程
分离范围广：配合 MES 或 MOPS 缓冲液使用，高效分离低至高分子量蛋白
开盒即用，解放双手，品质稳定
图. NovaPAGE™ Bis-Tris 凝胶实现理想的重复性与锐利条带。
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想次次跑出完美的条带？这些实操干货一定要收好！不管是缓冲液选择、电压设置，还是样品制备、常见问题排查，全是核心实操要点，帮你避开 WB 电泳那些坑，轻松拿捏实验细节～
Q1
MES 与 MOPS 缓冲液如何选择？
A：取决于目标蛋白大小及所需电泳速度。
MES 缓冲液适合低分子量蛋白的分离。其迁移速度快，小蛋白能高效分离，且避免扩散或跑出凝胶。
MOPS 缓冲液适合中高分子量蛋白的分离。其电导率较低，迁移速度慢，能为大蛋白提供更好的分辨率。
Q2
推荐电压是多少？
A：NovaPAGE 胶推荐在恒压 200 V 下电泳。若观察到轻微边缘效应（外侧泳道弯曲），可将电压降至 150 V 并延长电泳时间（约 35～40 分钟）。使用 MOPS 缓冲液也有助于减轻边缘效应。
Q3
样品制备有哪些要点？
A：使用 Bis-Tris 胶时，建议使用与 Bis-Tris 中性 pH 环境兼容的样品缓冲液，如 NuPAGE™ LDS 上样缓冲液（4X），并添加合适的还原剂（如 NuPAGE 样品还原剂（10X））。样品与上述上样缓冲液、还原剂混匀后，70 °C 加热 10 分钟，以确保蛋白充分变性，同时避免煮沸可能导致的蛋白降解。为了获得最佳结果，建议样品在实验当天进行还原处理，避免提前还原后冷冻保存。
Q4
常见问题如何快速排查？
A： 常见问题及解决方案如下：
➤ 微笑条带——常见原因是过热
排查方案：缓冲液新鲜（配制一周内使用）且正确配制。建议控制电泳温度为 20～25 °C，可置于冰浴中电泳以帮助散热。同时注意电泳液液面不要过低，以帮助散热。
➤ 拖尾/条带弥散/条带模糊——常见原因是样品质量与上样量。
排查方案
样品盐浓度过高易导致拖尾，需脱盐或稀释样品。
上样量过大易造成拖尾，建议每孔上样 10～20 µg 总蛋白。
变性不充分可导致条带模糊，需确保 70 °C 加热 10 分钟。难变性蛋白可延长至 15 分钟（避免煮沸）。
蛋白降解也会导致拖尾，建议在裂解液中添加蛋白酶抑制剂，并保持样品低温。
DNA 污染可能导致垂直条纹和拖尾，可以在样品制备时加入 DNase 或超声处理去除核酸污染。
➤ 泳道或条带歪斜——常见原因是设备未正确安装
排查方案： 确保电泳槽水平放置，卡夹稳固地装入电极。电泳槽倾斜或胶受力不均可能导致条带跑偏。检查缓冲液液面是否正确加至刻度线。
Q5
NovaPAGE 胶转膜有特殊注意事项吗？
转膜缓冲液中高浓度甲醇（例如 20%）可能导致 Bis-Tris 胶收缩，从而引起条带变形并降低转膜效率。为避免此问题，建议将甲醇浓度控制在 10%～15%。
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内容策划：邹礼平
内容审核：吴军
题图来源：自己做的
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