吲哚菁绿-聚乙二醇-乳铁蛋白(ICG-PEG-Lactoferrin)是一种集近红外荧光成像、靶向识别与生物相容性于一体的多功能生物共轭物。
一、结构组成
- ICG(吲哚菁绿):作为近红外成像核心单元,提供活体深层成像信号。其780nm的吸收波长与800nm的发射波长可有效穿透生物组织,避免自发荧光干扰,且生物毒性低、代谢速度快,在体内无长期蓄积风险。
- PEG(聚乙二醇):作为连接桥与生物相容性修饰单元,选用分子量2000-5000Da的线性PEG,可有效改善乳铁蛋白与ICG的相容性,减少非特异性细胞吸附,延长该衍生物在体内的血液循环时间,同时降低免疫原性。
- Lactoferrin(乳铁蛋白):作为靶向功能单元,是一种分子量约80kDa的铁结合糖蛋白,广泛存在于乳汁、唾液、血浆等体液中。它具有特异性识别肿瘤细胞表面高表达的转铁蛋白受体1(TfR1)的能力,同时具备抗菌、抗炎、调节免疫等生物活性。
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二、制备方法
ICG-PEG-Lactoferrin的合成方法以温和缩合反应为主,确保乳铁蛋白的生物活性与ICG的荧光性能不受破坏。具体步骤如下:
- PEG活性化预处理:选取两端含不同活性基团的PEG,或对PEG进行化学修饰(如羧基端活化),确保其可分别与ICG、乳铁蛋白特异性结合,减少非特异性反应。
- ICG与PEG偶联:在中性/弱碱性缓冲液(如pH 7.2-8.0的PBS)中,将ICG(含氨基/羧基活性位点)与活性化PEG的一端反应,形成ICG-PEG中间体。反应后通过透析或凝胶过滤层析,去除游离ICG,纯化中间体。
- ICG-PEG与乳铁蛋白偶联:将纯化的ICG-PEG中间体与乳铁蛋白混合,利用PEG另一端活性基团(如NHS与乳铁蛋白的氨基),在室温、避光条件下温和反应,形成ICG-PEG-Lactoferrin复合物(避免高温导致乳铁蛋白变性)。
- 终产物纯化与验证:通过透析(去除小分子杂质)或离心柱纯化,收集目标复合物。采用紫外-可见光谱(检测ICG特征吸收)、SDS-PAGE(验证纯度)确认偶联效果,最终避光冷藏保存。
温馨提示:供应产品仅用于科研,不能用于人体!
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