图1。锥虫鞭毛蛋白运输的活细胞成像快照。时空图分析量化了蛋白通过鞭毛的运动，包括顺行(A - 大列车，从基部到顶端)和逆行(R - 小列车，从顶端到基部)，使用Prime 95B相机可以在极短的曝光时间内检测到这些运动。
背景
菲利普·巴斯廷博士在巴斯德研究所的实验室主要致力于加深对锥虫寄生虫的理解，由于其在昏睡病中的作用，锥虫对人类健康具有重要意义。锥虫也提供了一个有用的实验模型，以增进对纤毛和鞭毛功能的理解。因此，该实验室开展了大量的细胞生物学研究，包括活细胞成像研究、四色免疫荧光(IF)和dSTORM成像。
挑战
巴斯廷博士的实验室研究锥虫鞭毛中的蛋白质运输。挑战在于这些蛋白质移动速度极快，在非常狭窄(300纳米)的环境中每秒移动2-5微米，这非常接近光学显微镜的分辨率极限。
成像是时间分辨率和灵敏度之间的权衡，即使在100毫秒的曝光时间下，颗粒在曝光期间也会移动半微米，导致图像出现拖影，因此这相当具有挑战性。当颗粒链移动到鞭毛末端时，它们会分裂成3个较小的链，这使得它们更难被检测到。
巴斯廷博士正在寻找一款具有良好灵敏度的相机，以缩短曝光时间。如果相机速度太慢，就无法捕捉到运动。之前的EMCCD相机因其灵敏度而被使用，但由于像素较大，这限制了分辨率。四色免疫荧光成像也面临挑战，因为在对Cy5等长波长染料进行成像时，量子效率较低。
灵敏度和信噪比的提升，使得95B成为了理想的相机选择。——菲利普·巴斯廷博士
解决方案
巴斯廷博士现在正在使用Prime 95B为了在成像蛋白质通过鞭毛运输时获得更好的时间分辨率，需要缩短曝光时间。“灵敏度和信噪比的提升意味着95B是最佳的相机选择。对我们来说，最重要的事情之一是在保持灵敏度的同时缩短曝光时间，以获得更好的时间分辨率。即使在10毫秒的极短曝光时间下，我们也能使用95B开始检测到蛋白质列。由于鞭毛的直径接近分辨率极限，配备100倍物镜的Prime 95B是我们最好的选择，它兼顾了速度、信噪比和灵敏度，非常适合我们的应用。”
巴斯廷博士还预见到未来将使用95B进行四重免疫荧光成像。他分享道：“对于像Cy5这样的长波长，量子产率以前一直是个问题。我们用Prime 95B测试了这项技术，对这款相机的量子产率感到非常惊讶，这使我们能够缩短此类图像采集的曝光时间。”
巴斯廷博士还提到，他期待在这些类型的实验中利用大视野的优势。他告诉我们：“这对于评估细胞表型非常有利，例如用于理解鞭毛构建和运动性的敲除模型。视野中包含的细胞越多，每次采集就能获得更多数据，从而最大化数据收集量并缩短采集时间。”
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