三箱社交实验（Three-Chamber Social Interaction Test）是目前神经行为学领域评价啮齿类动物社交能力、社交偏好、社交回避的金标准范式，广泛用于孤独症模型、神经发育损伤、精神障碍相关行为表型鉴定。
相较于焦虑、抑郁类行为实验，三箱社交对环境、预处理、操作细节的敏感度更高，也是课题组数据最容易出现“无差异、假阳性、基线紊乱”的实验。
一、实验核心原理
实验装置分为左、中、右三个互通箱体，利用啮齿类动物天然社交偏好习性完成行为检测，整体分为两个核心阶段：
1. 适应阶段：动物自由探索三箱腔体，熟悉环境，消除陌生环境应激带来的行为抑制；
2. 社交测试阶段：一侧箱体放置同龄同性陌生同种小鼠（社交对象），另一侧放置空笼/假笼（非社交对照）。正常野生型动物会显著偏向社交侧箱体，模型动物则表现出社交偏好下降、社交回避等表型。
该范式可精准区分社交能力缺陷与运动、焦虑异常，是孤独症、自闭症样行为、社交退缩模型的核心评价手段。
二、实验前期准备与环境质控 1. 环境条件
实验环境保持低噪、避光、气流稳定，光照强度统一控制在300–500 lux，避免强光诱发动物高度紧张、抑制社交行为。全程无人员走动、无光影晃动、无异味干扰。单只实验结束后，彻底擦拭三箱腔体、笼具，清除尿液、皮屑、气味残留，杜绝嗅觉线索干扰社交选择偏好。
2. 受试动物与刺激小鼠预处理
受试动物提前30–60 min移入实验房间环境适应，缓解转运应激。用于社交刺激的陌生小鼠，需与受试动物品系、周龄、体重匹配，且从未与受试动物接触，避免熟悉度抵消社交偏好。同时刺激小鼠需提前适应笼具，保证实验中无过度躁动、呆滞行为。
三、文献通用标准化实验流程
大小鼠三箱社交行为箱，XR-XJ117，上海欣软
阶段一：自由适应期（10 min）
移除两侧笼具，将受试小鼠轻柔放置于中间箱体中心位置，使其自由探索三个箱体。该阶段目的是消除环境陌生应激，稳定动物活动基线，避免初期呆滞影响后续社交数据。全程记录活动轨迹，用于后续校正运动能力偏差。
阶段二：社交偏好测试期（10 min）
在左右两侧箱体分别放置固定笼具，一侧放入陌生小鼠，另一侧空置。将受试小鼠放回中间箱体，自由穿梭探索。实验结束后统计各箱体停留时长、穿梭次数，计算社交偏好相关指标。
全程保持两侧笼具外观、重量、位置完全对称，仅存在“有无社交对象”单一变量，规避位置偏好、器械差异带来的系统误差。
四、核心观测指标与数据解读
核心指标
统计方式
行为学意义
社交侧停留时长/次数
受试动物在含陌生小鼠箱体的累计停留时间、进入次数
反映动物社交趋近意愿，时长越低，社交缺陷越显著
非社交侧停留时长/次数
受试动物在空置笼具箱体的累计停留时间、进入次数
作为空白对照，排除位置偏好、器械偏好干扰
中间箱体停留时长
中心区域徘徊、静止时长
反映犹豫、焦虑、回避状态，时长过高提示行为异常
总穿梭次数
三箱之间往返穿梭总次数
用于校正自主运动能力，排除运动障碍假阴性
五、高频实验误差与关键避坑要点
三箱社交数据翻车率远高于常规焦虑、抑郁实验，核心问题集中在细节质控：
1. 刺激小鼠不标准：刺激鼠躁动、呆滞或与受试鼠熟悉，会直接导致社交偏好消失，组间数据无差异；
2. 气味残留未清理：前序动物残留气味会形成记忆线索，干扰受试鼠的社交选择判断；
3. 环境应激过高：噪音、强光、人员干扰会让动物全程处于避险状态，优先规避陌生环境，掩盖真实社交表型；
4. 两侧器械不对称：笼具松紧、摆放角度差异，会造成器械偏好，混淆社交偏好结果；
5. 忽略运动校正：部分模型本身存在运动能力下降，未结合总穿梭次数校正，易误判为社交缺陷。
六、参考文献
[1] Nadler J J, Moy S S, Dold G, et al. Automated apparatus for quantitation of social recognition in mice[J]. Genes, Brain and Behavior, 2004, 3(5):303-314.
[2] Yang M, Scattoni M L, Crawley J N. Behavioral test batteries for mouse models of autism spectrum disorders[J]. Nature Protocols, 2007, 2(11):2790-2802.
[3] Silverman J L, Yang M, Lord C, et al. Behavioural phenotyping assays for mouse models of autism[J]. Nature Reviews Neuroscience, 2010, 11(7):490-502.
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