WB真是踩不完的坑，最烦的是！显影到最后，才知有没有。研究生3年实验心得，新手直接抄作业：同样的WB，为什么我的条带像艺术品，你的像抽象画？
谁都是从无到有过来的，我之前连续半个月跑不出清晰条带，杂带满天飞、条带歪斜，重复实验耗了超多样本和抗体，一度怀疑实验思路有问题。 翻了无数文献、问了师兄师姐、换了无数试剂，才发现大多WB翻车问题都出在最基础的制胶环节！ 做胶作为最基础的第一步，最容易忽略但却是最最重要的一步！
今天就为大家带来我整理的所有制胶必踩大坑：
1.分离胶浓缩胶配比误差，分离效果差
2.凝胶凝固速度不均，条带分离紊乱
3.试剂盒试剂纯度不够，背景脏杂带多
4.胶板漏液、气泡没排干净，条带变形
之前换过好几种自制试剂、普通分装试剂盒，要么凝固慢要等1h+，要么条带背景脏，拍图完全达不到投稿标准。 后来碰巧用了一下百代生物，凝胶分离均匀，低杂带，曝光图片干净，简直是救我小命！
给同样做WB的师弟师妹们分享一下我的制胶流程：
✅清洗胶板彻底晾干，防止漏胶
✅使用试剂盒预混液配置分离胶，平稳灌胶，封水层静置
✅分离胶凝固后倒掉封水，配置浓缩胶插梳 （ps：彩色分离胶加样对我的眼睛很友好，真不错呀真不错hhhhhhhhh）
✅凝固后拔梳上样，恒定电压电泳，条带分离度稳定
附上之前师兄师姐做实验用的国内某知名厂家PAGE凝胶预染Marker及不同上样量蛋白的电泳图。然后图2是我这次换了新的制胶剂的结果，因为我们实验室做的基因PYD结构域蛋白分子量较小，才十几，之前10%的胶都很难分出条带，但这次的胶就很完美！甚至还能跑出8KDa的marker，这下可以把目的大小条带都分开来，孵育抗体也更加方便了。这也太是那个了！以后都可以直接一块胶做了，能省下大量重复实验时间，少熬夜、省样本。并且我发现在上样量很多也不会导致电泳条带弯曲外扩， 整体电泳时间也显著缩短好多，简直是实验狗福音！！！
三年WB实验心得总结： 不用一味纠结电泳、转膜条件，制胶才是基础门槛。试剂耗材选靠谱厂家，科技改变研究牲生活get√！评论区交流实验踩坑经验～
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