首先明确两个概念：
激发光：给染料「充电」的光，由仪器激光器提供;
发射光：染料释放能量的光，就是我们检测到的信号

不同染料对应不同的激发 / 发射波长，要和仪器通道精准匹配 。下面是核心选择逻辑：
1、首先看仪器配置 有什么激光、什么通道，就配什么荧光。 先确认你流式仪的激光器（405、488、561、640/638nm 等）和对应通道，这是选染料的前提！
2、激发匹配 荧光素激发峰 ≈ 激光波长 荧光素的激发峰要尽量靠近激光波长，激发效率才最高 例：PE（激发峰～565nm）优先配 561nm 激光，没有就用 488nm 替代 荧光发射峰落在通道滤光片范围内。
3、看表达强弱，强弱配对 这里汇总了常见的荧光染料的亮度情况 超亮组：PE、PE-Cy7、APC、APC-Cy7、BV421/BV510 高亮组：PerCP-Cy5.5、Alexa Fluor 647 中亮组：FITC、Alexa Fluor 488 低亮组：PerCP、PI（仅死活染色） 例如 高表达抗原（如 CD45、CD3）→ 配中等 / 低亮度染料（FITC、PerCP） 低表达抗原（如转录因子、细胞因子）→ 配高亮度染料（PE、APC、PE-Cy7）。
4、要注意！减少光谱重叠 共表达的标记（比如同一个细胞上同时染 CD4 和 CD8），尽量选光谱分离度高、重合度低的组合，避免补偿过大 例如：PE + APC 比 FITC + PE 更友好。

编辑：冷漠小 z
内容来源：丁香大师姐（小红书）

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