郑州大学第一附属医院河南省临床重点实验室研究团队在验证miR-30c和miR-142-3p在结核病患者和健康对照之间的差异表达,和研究微小核糖核酸(miRNA)的性能以及随后的结核病诊断模型的实验过程中,使用BIOG血清血浆游离RNA提取试剂盒成功提取出血清样本中总游离RNA!
血清游离RNA(cfRNA)含量极低、片段短小,且极易发生降解,这是提取过程中的核心难点。血清中富含蛋白、脂类、血红蛋白与核酸酶,会持续降解游离RNA,还会造成共沉淀污染,抑制后续逆转录与扩增。样本采集、凝血、冻融环节稍有不当,还会导致血细胞破裂,释放大量基因组DNA与细胞RNA,严重稀释目标cfRNA。常规柱提法回收率不稳定,小分子游离RNA易随废液流失;磁珠法虽适配短片段,但易受血清杂质干扰,洗脱效率波动大,整体提取难度偏大。
该团队研究者在几经摸索与尝试后,最终使用BIOG血清血浆游离RNA提取试剂盒成功提取出了血清样本中的游离RNA,并以此为模板成功对候选标志物miR30c、miR-142-3p进行了逆转录与荧光定量PCR检测。
相关文献:Integrating serum microRNAs and electronic health records improved the diagnosis of tuberculosis
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