流感病毒(IFV-A)抗体IgM检测试剂盒(酶联免疫法)
作者:深圳市恒昊生物科技有限公司
什么是甲型流感病毒(IFV-A)
甲型流感病毒属于正粘病毒科,是一种分节段的单链负链RNA病毒,根据病毒表面两种关键糖蛋白——血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的抗原性差异,可以进一步分为多个亚型,目前已经发现18种HA亚型和11种NA亚型,常见的可感染人类的亚型包括H1N1、H3N2等。
和其他类型流感相比,甲型流感病毒最显著的特点是抗原变异性极强:病毒在复制过程中很容易发生点突变积累,导致抗原漂移,让原本的疫苗保护力下降;当不同亚型的流感病毒同时感染同一个宿主时,还可能发生基因重配产生全新的毒株,引发抗原转变,这种情况很可能导致易感人群大幅增加,引发区域性甚至全球性的大规模暴发流行。
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检测操作流程
该检测一般需要采集受检者静脉血清作为待检样本(部分也可使用血浆),操作步骤大致分为以下几步:
- 试剂准备:检测前将试剂盒从冷藏环境取出,平衡至室温(一般18-25℃),取出所需包被微孔板,未使用的板条放回密封袋密封冷藏保存;按照说明书要求配制好洗涤液、样本稀释液等工作液。
- 样本处理与加样:将待检血清用样本稀释液按要求比例稀释后,加入到对应的微孔中,同时预留阳性对照孔和阴性对照孔,分别加入对应对照品,轻轻振荡微孔板混匀样本。
- 温育反应:将微孔板放入37℃恒温箱中温育,让抗原抗体充分结合,温育时间按照说明书要求控制,一般为30-60分钟。
- 洗板:温育结束后,弃去板内液体,用配制好的洗涤液反复冲洗微孔板数次,洗去未结合的物质,去除非特异性干扰,洗完后拍干残留液体。
- 加酶标二抗:向每个微孔中加入酶标记的抗人IgM抗体,再次放入37℃恒温箱温育,时间一般为30分钟,之后重复洗板步骤。
- 显色与终止反应:向每个微孔加入显色底物,避光条件下室温或37℃显色10-15分钟,之后加入终止液停止反应,颜色会从蓝色转变为黄色。
- 结果判读:使用酶标仪在指定波长(一般为450nm)下读取各孔的OD值,按照说明书设定的判定标准判断结果:通常以cut-off值(临界值)为标准,样本OD值≥cut-off值为阳性,提示存在甲型流感病毒近期感染;样本OD值<cut-off值为阴性。
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