基本组成与结构特性
CY5-氯化血红素(英文名称CY5-Hemin)是近红外荧光染料CY5共价标记氯化血红素得到的功能性荧光探针,属于铁卟啉类荧光标记物。
- 氯化血红素母核结构:C₃₄H₃₂ClFeN₄O₄,分子量约651.94 g/mol,是天然血红素的体外纯化形式,保留了铁卟啉的生物活性
- CY5荧光属性:发射波长在650–670nm的近红外波段,生物组织自发荧光背景极低,光穿透力可达5–10mm,检测灵敏度可达ng级
氯化血红素结构式:
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偶联制备原理
CY5的活性基团(一般为NHS酯或马来酰亚胺),在弱碱性条件(pH7.0–9.0)下与氯化血红素分子上游离的氨基,或经活化后的羧基发生反应,形成稳定的酰胺共价键。
- 偶联位点会选择不影响铁离子结合活性的区域,保证产物保留氯化血红素的生物学活性,标记后与血红蛋白结合率通常≥90%
- 纯化方式:反应完成后通过凝胶柱色谱或透析去除未反应的游离CY5,最终通过质谱和荧光光谱完成产物验证
应用场景
- 血红素代谢示踪:在活细胞或活体层面追踪血红素的摄取、转运和分布过程,研究血红素代谢通路异常相关疾病机制
- 铁卟啉类药物的体内评价:作为荧光示踪物,用于含铁卟啉结构药物的细胞摄取效率检测、组织分布分析,辅助药效评估
- 氧化应激相关研究:基于氯化血红素的氧化还原活性,结合荧光信号变化,可用于细胞内活性氧检测相关的机制研究
储存与使用注意事项
- 储存条件:-20℃避光密封保存,开封后建议分装,避免反复冻融,反复冻融会导致荧光淬灭
- 荧光稳定性:中性环境(pH6.0–8.0)中荧光稳定性最佳,实验操作过程需严格避光
- 溶解方法:建议先用DMSO配制成高浓度母液,再用PBS或细胞培养基稀释至工作浓度,避免直接接触高浓度钙镁离子
温馨提示:供应产品仅用于科研,不能用于人体!
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