三阴性乳腺癌（TNBC）预后差、治疗手段少，是严峻的临床难题。连翘（Forsythiae Fructus）是临床常用的传统中药。连翘脂素（Phillygenin）是从连翘中分离出的一种木脂素类化合物，具有显著的生物活性。现代药理学研究表明，连翘脂素对多种疾病具有显著治疗潜力，包括炎症性疾病、癌症、细菌感染和病毒感染。然而，其对三阴性乳腺癌（TNBC）的抑制作用及直接靶点仍不清楚。
2026年10月1日，杭州医学院药学院梁广团队在Acta Pharmaceutica Sinica B（IF=14.6）发表了题为“A novel strategy for stabilizing the β-catenin destruction complex: Phillygenin targets AXIN1–Dvl interaction to inhibit triple-negative breast cancer”的文章，揭示天然化合物连翘脂素通过特异性结合AXIN1的Gly766位点，阻断AXIN1与Dvl的相互作用，从而稳定β-连环蛋白降解复合物、促进β-连环蛋白降解并抑制Wnt信号通路，最终在体外和体内抑制三阴性乳腺癌的增殖与转移。
主要内容
本研究鉴定出AXIN1—Wnt信号降解复合物中的关键支架蛋白—为连翘脂素（phillygenin）的直接分子靶点。通过蛋白质组学、生物膜层干涉技术、细胞热位移实验（CETSA）和药物亲和反应靶点稳定性实验（DARTS）等整合方法，作者证明连翘脂素特异性结合AXIN1的Dishevelled（Dvl）相互作用结构域（第732–862位残基）中的甘氨酸766位点。这种结合稳定了AXIN1，并有效阻断其与Dvl的相互作用，阻止Dvl介导的AXIN1向细胞膜募集。因此，连翘脂素维持了β-连环蛋白降解复合物的完整性，促进β-连环蛋白降解，并抑制TNBC细胞中异常激活的Wnt/β-连环蛋白通路。体外实验中，连翘脂素剂量依赖性地抑制TNBC细胞增殖、迁移并诱导细胞凋亡。
Graphical abstract
连翘脂素结合AXIN1，阻断AXIN1–Dvl相互作用。这稳定了降解复合物，驱动β-连环蛋白降解并抑制Wnt信号传导，从而诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡。
主要结果
1、连翘脂素在体外抑制TNBC增殖和转移
连翘脂素剂量依赖性地抑制MDA-MB-231、4T1和BT549细胞的增殖与迁移，且对正常细胞无明显毒性。机制上，连翘脂素主要通过诱导细胞凋亡发挥抗TNBC作用，Z-VAD预处理可逆转其效果，而坏死、自噬和铁死亡抑制剂无此作用。
2、连翘脂素在体内抑制TNBC生长
在4T1原位小鼠模型和PDX原位TNBC模型中，连翘脂素（3和10 mg/kg/天）剂量依赖性地抑制肿瘤生长和转移，减少肝肺转移灶，并增加肿瘤组织中的凋亡水平。即使在无抗肿瘤生长活性的低剂量（1 mg/kg）下，连翘脂素仍保留抗转移活性，表明其抗转移作用独立于抗生长作用。
3、鉴定AXIN1为连翘脂素的直接靶点
通过Sepharose 6B-连翘脂素 pull-down结合蛋白质组学筛选，鉴定出AXIN1为连翘脂素的候选靶点，生物膜干涉、pull-down、CETSA和DARTS实验均证实二者直接结合（KD = 2.19 × 10⁻⁶ mol/L）。连翘脂素不影响AXIN1蛋白表达水平，表明其通过结合而非调控表达发挥作用。
图1 AXIN1是连翘脂素的直接靶点
4、AXIN1在TNBC中低表达且与不良预后相关
生物信息学分析显示AXIN1低表达与乳腺癌不良预后相关，且TNBC细胞系和肿瘤组织中AXIN1表达显著低于非TNBC细胞和癌旁组织。过表达AXIN1可抑制TNBC细胞增殖和迁移，并促进细胞凋亡。
5、连翘脂素通过AXIN1抑制TNBC进展
siAXIN1可显著逆转连翘脂素对TNBC细胞增殖和迁移的抑制作用；在AXIN1敲除的4T1原位小鼠模型中，连翘脂素的抗肿瘤生长和抗转移疗效被显著逆转。结果表明连翘脂素的抗TNBC药理作用依赖于AXIN1。
6、连翘脂素结合AXIN1的甘氨酸766位点
截短突变实验表明连翘脂素结合AXIN1的732–862肽段（Dvl结合结构域），虚拟对接和点突变实验进一步确认Gly766为关键结合位点。G766A突变显著降低连翘脂素与AXIN1的相互作用，并使连翘脂素丧失抗TNBC活性。
图2 Gly766是连翘脂素结合AXIN1的关键位点
7、连翘脂素通过阻断与Dvl的相互作用影响AXIN1亚细胞定位
连翘脂素处理减少AXIN1与Dvl的相互作用，促进AXIN1在细胞质中积累并降低其在质膜上的水平，同时减少AXIN1与Dvl的共定位。过表达Dvl可削弱连翘脂素对AXIN1定位和β-连环蛋白水平的影响。
图3 连翘脂素阻断AXIN1-Dvl相互作用并抑制AXIN1的膜定位
8、连翘脂素通过靶向AXIN1阻断Wnt信号介导的凋亡抵抗
连翘脂素增强β-连环蛋白和APC的磷酸化水平并降低β-连环蛋白蛋白水平，同时增加Cleaved-Caspase3和Bax/Bcl-2比值，促进TNBC细胞凋亡；这些效应在AXIN1敲低后被逆转。与经典Wnt通路抑制剂LGK974相比，连翘脂素在抑制TNBC转移方面表现更优。
总结
本研究表明，连翘脂素在体外和体内均能有效抑制TNBC进展。机制上，采用蛋白质组学分析阐明AXIN1是连翘脂素的直接靶点，并通过生物膜干涉和TNBC动物模型中的AXIN1敲除进一步验证。连翘脂素与AXIN1的732–862肽段中的甘氨酸766相互作用，从而阻断AXIN1与Dvl之间的相互作用。这抑制了Dvl向AXIN1的募集，并进一步阻止降解复合物的解离，从而诱导TNBC细胞凋亡。总之，这一发现揭示了AXIN1在TNBC进展中的关键作用，证明了连翘脂素对TNBC的强效抑制作用，并为设计阻断AXIN1与Dvl相互作用的药物提供了先导化合物。
文献链接
https://doi.org/10.1016/j.apsb.2026.09.018
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