人粘膜相关上皮趋化因子(MEC/CCL28)ELISA Kit
供应商:深圳市恒昊生物科技有限公司
什么是人MEC/CCL28 ELISA Kit
趋化因子CCL28,也被称为粘膜相关上皮趋化因子,是一种主要由粘膜上皮细胞分泌的小分子趋化蛋白,它可以引导免疫细胞定向迁移到粘膜组织,在呼吸道、消化道、生殖道等粘膜部位的免疫防御、免疫稳态维持中发挥不可替代的作用,同时现有研究也发现它的异常表达和炎症性疾病、肿瘤的发生发展存在关联。
人MEC/CCL28 ELISA Kit就是专门用于检测人血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等生物样本中MEC/CCL28浓度的预包被标准化试剂套装。这款试剂盒已经预先完成了关键试剂的优化配制,不需要研究者自行调试抗体、抗原等核心组分,仅需要按照说明书操作就可以快速完成多样本的批量检测,大幅降低了实验门槛,也提升了不同实验室间检测结果的可重复性。
检测原理
目前市售的人MEC/CCL28 ELISA Kit绝大多数采用双抗体夹心法,这也是检测大分子蛋白类物质最经典、最稳定的ELISA反应模式,具体原理流程如下:
- 预包被固相载体:试剂盒已经将高纯度的MEC/CCL28单克隆抗体预先吸附固定在96孔酶标板的微孔内壁,多余未结合的抗体已经提前清洗去除,抗体可以稳定结合在固相载体上。
- 样本结合:向微孔中加入待测样本,样本中存在的MEC/CCL28会和预包被在孔壁上的抗体发生特异性结合,未结合的样本杂质(其他蛋白、小分子物质等)会通过清洗步骤被去除。
- 酶标二抗结合:随后加入生物素标记的MEC/CCL28多克隆抗体(也有部分试剂盒采用直接辣根过氧化物酶标记),这一抗体会和已经结合在固相抗体上的MEC/CCL28结合,形成「固相抗体-抗原-酶标抗体」的三明治式复合物,未结合的游离酶标抗体再次通过清洗去除。
- 底物显色:加入辣根过氧化物酶(HRP)催化的显色底物(通常为四甲基联苯胺,TMB),复合物上标记的酶会催化底物发生显色反应,原本无色的底物会转化为蓝色,加入终止液(一般为稀硫酸)后会变为稳定的黄色。
- 浓度定量:MEC/CCL28的浓度和最终显色的深浅呈正相关:样本中MEC/CCL28含量越高,形成的复合物越多,催化产生的有色产物越多,溶液吸光度值就越高。检测时会同时做一系列浓度梯度的标准品,通过标准品绘制浓度-吸光度标准曲线,再根据待测样本的吸光度值,就可以计算出样本中MEC/CCL28的实际浓度。
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