CRISPR等新技术的出现使我们可以更加自由地修改基因信息。经过基因编辑的iPSC和ESC可以稳定地遗传突变基因,而由于干细胞本身具备极强的扩增与分化潜力,这一应用可以广泛用于基础研究、模型建立、生物药研发和药物筛选等场景。

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服务流程

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我们采用的是电穿孔递送CRISPR/Cas系统的方法对干细胞进行基因编辑,具有无滋养层、无抗性基因敲入、特异性高的特点。我们的团队在基因编辑领域有丰富的经验,可以根据客户的需求定制合适的基因编辑方案。我们交付的成品均为确定基因型的单一克隆,还可以根据客户的需求增加质控项:

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基因编辑场景

基因敲除

基因敲除是最基本和常见的基因编辑场景,常见的应用场景有:验证某目标蛋白质失活后对细胞造成何种功能的缺失,确定某基因编码的蛋白质在信号通路中处于哪个节点,等等。

引入基因敲除的最简单手段是制造一段DNA双链断裂(Double-Strand Break,DSB),以使用CRISPR工具举例简述这一过程: 和 sgRNA 结合的 Cas9 蛋白在 sgRNA 的引导下与目标基因结合,在 PAM 序列上游( 5 ’ 端)的第 3 和第 4 个碱基之间制造 DNA 双链断裂。 在检测到 DNA 双链断裂 后,如果细胞不是刚好处于复制周期内存在一对姐妹染色体( Sister Chromosome )作为修复模板,细胞会启动被称为非同源性末端链接( Non-homologous End Joining,NHEJ )的机制来对 DNA 进行不完全的修复。 在这一系列过程中,名为 Artemis 的内切 / 外切酶会处理断裂的 DNA 末端,随机地移除 1 至数个碱基,之后连接酶就可以将处理过后的断裂 DNA 连接起来。 在连接的过程中也有可能随机插入数个碱基。

由于遗传密码的编码机制是3进制,删除/插入的碱基数不为3的倍数即可视为成功的基因敲除。

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点突变

点突变是向基因上指定位点添加、删除或替换目标碱基,常见的应用场景有:修复致病基因,构建携带致病基因的细胞模型,等等。不同于基因敲除,这一类型的基因编辑有明确的目的基因型,因此需要导入一个用于同源修复的模板,这在当前的应用中通过合成单链寡核苷酸(ssODN)可以很方便地实现。

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基因敲入

过表达、融合表达、报告基因敲入都属于基因敲入的范畴。通常的ssODN很难承载上千kb的信息量,使用质粒是更好的选择。我们的科研服务平台在质粒设计和构建方面有丰富的经验,可以定点敲入长达5kb的目标基因。

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跃赛生物科研服务平台由来自不同领域的专业人士组建,团队拥有丰富的干细胞基因编辑经验,建立了一套稳定、成熟的基因编辑方法体系,足以应对常规和非常规、合理与不合理的客户需求。

根据切割 位点和 敲入 片段的不同, 基因编辑 的难度方差 很大 , 所以 找一个久经考验、处乱不惊、具有丰富 知识 储备 的团队 才能 确保您 尽快拿到实验所需的细胞系 ,在发文章的道路上一骑绝尘!扫描下方二维码添加微信咨询相关服务信息,说出你的需求,剩下的都交给我们!