国自然的前期「工作基础」部分,也是国自然项目判断延续性最重要的部分。
需要注意的是,该部分有两个关键点:
与本项目相关的研究工作积累
已取得的研究工作成绩
那么我们就今年审阅的几百份标书,总结出来的「工作基础」问题给大家陈述一下:
(一)预实验体量不足
这个问题最为突出,可想而知,本身作为临床医生,科研只是附带做做,哪有精力跟大家一起「卷」,所以最后形成的本子中的预实验,往往只有大量的「生信图」和少量的柱状图、WB 结果。
而除了精力问题导致预实验不足以外,还有一个认知问题也很严重,就是申请人设计的国自然假说太简单导致,殊不知别人的本子不仅思路「卷」、预实验也「卷」,所以这就导致「瞎子摸象」的困局,始终摸不到国自然的「真象」,那么距离国自然中标也就十分遥远。
为什么预实验要足够多?①专家挑刺时,不会以证据链不足秒杀你;②预实验多可以弥补一下「文章不够好」的短板;③预实验多,证明你花了很多经费,那你并不是白嫖的态度来对待国自然,专家也能看到你的努力。
有些同学会问:会不会因为预实验多,专家觉得你都做完了而不予资助?
既然国自然本子包含多方面顾虑,存在各种心理维度的博弈,在面对这个问题时,更愿意相信专家喜欢「预实验充足」的本子。
两害相权取其轻,永远是国自然本子的正解。
所以预实验应该包括 3-4 张组图:
① 第一张:证明你的细胞系和动物模型,成功;
② 第二张:生信分析、分子信号轴关键分子和临床问题的相关性,验证关键分子在临床样本、细胞系和动物模型中的表达趋势;
③ 第三张:过表达或者沉默干预后,观察细胞和动物模型的表型,检测一下 XXX 通路的激活情况;
④ 第四张:数据库预测以及分子对接分析;加一个分子互作的实验图,证明分子机制的假说成立。
(二)图注(legend)不详实、预实验图模糊不清
字面意思,就是图注缺失,或者描述过于粗糙,没有介绍单图的实验方法和分组情况。
而有些童鞋的预实验图非常模糊,图像像素极低,这又不利于专家审阅,不美观
(三)对照组缺失
对照组包括空白对照、阴性对照、阳性对照,但一般来讲,至少要有阴性对照,空白对照可以忽略。阳性对照大部分情况不是必须的,但是药物实验中阳性对照却是必须的。
而过表达和敲低这种实验,阴性对照组一定需要,切不可省略。一般用「空白质粒」「scrambles」「sh-NC」「si-NC」「Mock」作为阴性对照组。
(四)内参前后文不一致
全细胞 WB 内参一般有 GAPDH、β-actin、β-tubulin 等,但有时候因为代表作属于早几年发表的,所以和现在预实验之间的内参可能会存在差异,这种都可以理解,但最好是内参保持一致。但有时候同一批预实验中内参也有不一致的情况,还望前后保持一致。
(五)没有统计显著性标注
预实验按理来讲都是要做到技术性重复和生物学重复,因此每个实验务必形成一个统计学分析结果,并且附带显著性标注「***」「ns(不具有统计学意义)」等。
当然如果预实验太多,可以选择性进行统计分析。
(六)WB 条带背景不均一或者分子量(kDa)没标注
有些 WB 看起来比较假,因为背景不均衡,不均一,像是不同实验条件下产生的,而且有时候单图的边缘有明显的的切割的痕迹。
另外一个经常出现的问题就是:WB 结果不标注分子量。这不是一个特别规范的学术行为。
(七)分子机制的结果缺失
分子机制的证据链往往成本很高,毕竟 CO-IP、pulldown、ChIP、荧光素酶报告实验等的成本不低,而且往往做了也不一定有阳性结果,所以很多本子并没有放分子机制的预实验结果图,这也是很多国自然本子的通病之一。解决方案就是用数据库预测、motif 预测、各种炫酷的分子对接分析来弥补了。
(八)肿瘤本子预实验只有一株细胞系
强烈建议肿瘤类的本子,预实验中最好使用两株细胞系做功能实验,并且肿瘤类的本子一定含有体内实验。
(九)已取得工作成绩部分
已取得工作成绩部分要简明扼要,一般的格式是一段话介绍一下自己的科研经历,可以提一下自己的大牛导师;然后列出自己的代表作文章,并标注一下作者位次以及中科院分区;挑 2-3 篇文章,把重要的实验结论(或者文章的机制图)放一张出来,简单描述一下。而有些同学,把各种实验图都抖出来,罗列出 10-20 张小图,光图片的序号都排到了十几,这样的阅读感受非常不好,专家读着累,打分不会太高。
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